가능합니다!!~ 그러나 adhesion cell보다는 약간 손이 많이 가는데요.
일단 petridish well plate를 준비하시고. 적당량의 세포를 well에 넣어줍니다. (6, 12, 24 well 아무거나... 24well은 pipetting이 조금 힘들 수도 있으므로 약간 큰거 권장하나 antibody가 많이 들어갈겁니다.) fixation을 하실 때 pipett으로 다 걷어서 tube에 옮기시고 spin down 하셔서 pellet을 만듭니다. 4% PFA로 다시 풀고 fixation합니다. 그리고 다시 spin down하시고 PBS로 washing하시면서 풀어줍니다. 이처럼 붙는 세포와 마찬가지로 단계를 거치시는데 단계마다 세포를 모아주고 풀어주고 하시면 됩니다. 문제는!! washing, permeabilizing, blocking, antibody reacting 단계마다 spin down->resuspend를 하기 때문에 cell spindown을 너무 쎄게 하시거나 resuspend를 너무 쎄게하시면 세포가 많이 깨집니다. 가능한 washing을 줄이시고 blocking한 다음에 blocking상태에 primary를 바로 넣으셔서 dillution하시는게 좋고, primary에 바로 fluorscence 붙어있는 antibody를 사용하시는 등 spindown, resuspend 과정을 많이 줄이시는게 좋을 것 같습니다. 그리고 spindown하시면서 BSA나 serum 그리고 antibody가 pellet과 섞여서 down 될 수 있으니 washing이 잘 되지 않으면 nonspecific의 천국이 될 수 있으니 조심하시고요. neurosphere나 mammosphere등을 염색한 논문들 꽤 되니 참고하시면 더 좋고요~
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IC
(비회원)
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2009.04.03 07:51
1. cytospin (centrifuge를 통해 cell을 slide에 부착시키는 기계)를 이용한다.
2. poly-l-lysine으로 코팅한다. (단 많은 세포가 붙기때문에, Ab. 볼륨이 늘어난다는 단점이 있음.)
둘다 해봤는데, 1번 방법 추천이요...cytospin 후에, dako pen으로 동그랗게 경계를 그려주면, Ab. reaction volume을 현저하게 줄일 수 있습니다. (50 마이크로리터면 충분)
