제가 볼 때는 wash 조건을 잡으셔야 할 것 같습니다.
보통 IP wash를 할 때 bead를 포함하여 상등액 100ul남기고 buffer 1ml 첨가하시죠?
10min씩 rotator 돌릴 것 없이 부드럽게 inverting만 하셔도 충분할 듯 합니다.
여기서 정량적인 생각이 좀 필요한데요.
상등액 100ul에 buffer 1ml을 첨가하신다는 것은 bead에 붙지 못한 상등액에 남아 있는 protein이 1/10로 dilution이 된다는 개념이잖아요?
만약 protein이 굉장히 overexpression 되어 1/10씩 3번 dilution해도 antibody에 잡힐 정도로 남아있다면, background는 계속 잡힐 것 아닙니까?^-^;
wash를 5~6번 정도로 더 늘려 보시고, 상등액을 50ul정도로 줄여보시는 것도 효율적인듯 합니다.
새로운 마음으로 buffer도 새로 만들어 보심이 어떨지요.^-^
