Neuron cell culture할 때 trypsin은? | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q Neuron cell culture할 때 trypsin은?

TRYPSIN?(비회원)

08.02.27 18:28
조회10052

Neuron cell culture할 때 papain을 주로 쓰다가 trypsin으로 바꾸어 보았습니다.
그런데 결과가- 여러요인이 있겠지만 -어쨋든 그닥 좋지 않네요.
trypsin을 쓴다는 랩이 있어 해보긴 했는데 권하지않는다는 랩도 있어 고민입니다.
trypsin을 쓴다면 inhibitor을 같이 넣어야하나요? 저희는 papain과 똑같이 사용했는데 어떻게 다르게 해야하는지 아니면 그냥 비싸지만 papain을 쓰는 게 나을지..
더불어 trypsin은 primary culture할때,trypsin-edta는 cell line split할 때 쓰던데 이유가 뭔지도 궁금합니다.
culture해보신 분의 도움말씀을 기다릴께요^^

Cell Biology > Cell Culture

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A 답변 3

레벨04 질문쟁이
08.02.28 10:46


직접 neuron cell을 culture해본적은 없지만 

같은 lab에 있는 선배가 하는걸 몇 번 본적이 있는데 

그냥 trypsin을 사용했었습니다. 

그리고 trypsin은 cell attachment에 관련된 factor를 제거하는 일종의 

protease입니다. 

장시간 처리 하는 것은 좋지 않겠죠

답변리플

레벨01 TRYPSIN? (비회원)
08.02.28 11:55

답변감사합니다.
혹시 trypsin을 쓸 때 trypsin inhibitor를 같이 써야하는지 trypsin-edta로 split할 때 serum든 media를 넣어 중화하여 trypsin-edta의 반응을 정지시키는 것과 같은 원리인지 궁금합니다.
저희는 trypsin inhibitor를 쓰지 않고 
1.Trypsin과 DNase를 조직이 든 tube에 넣고 
2.1.을 15~25분 37C incubator에 넣어 digestion후 
3.serum든 media를  넣어 centrifuge했거든요.
조언 부탁드립니다.

답변리플

레벨01 휴! (비회원)
08.02.28 14:31

Trypsin 처리는 primary cell이던지 cell line이던지 다 좋치 않는 것은 
아실꺼라고 생각되네요...
저도 neuron cell 분리후에 trypsin처리하고 media+serum에서 trypsin제거합니다.
글쓴분이 아시는 것 처럼...같은 원리로 serum이 trypsin의 활성을 억제합니다.