제가 antibody제작을 위해 단백질을 정제하는 중입니다. GST를 이용하여 정제를 하고
있는데 잡 밴드가 넘 많아서 sds-page gel에서 단백질 정제를 하고자 합니다.
근데 sds-page gel에서는 단백질이 변성되어있는 상태이자나요(?)
이걸 가지고 antibody를 만들수 있나요? native gel로 해야하나???
그리고 gel로부터 단백질을 추출해 낼수 있는 방법좀 알려주세요...
감사합니다.
항체는 아미노산 일차서열만 있어도 만들어 집니다. Denatured form을 가지고 만드셔도 되지만 구조적인 epitope을 인지하는 항체를 만드시고자 한다면 native form을 항원으로 사용하셔야 합니다.
SDS-PAGE gel에서 단백질을 추출하는 것은 아주 쉽습니다. 10-50 mM Tris (pH7-8), 0.1% SDS가 포함된 용액에 gel slice를 넣고 잘게 부순후 짧게는 한시간에서 길게는 overninght으로 상온에서 diffuse시킨 후 상층액만을 얻어 이를 농축하시면 됩니다.
