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sds-page gel에서 단백질 정제

레벨1 로스트 ()

등록일 2007.06.20 17:51:37
조회6869

제가 antibody제작을 위해 단백질을 정제하는 중입니다. GST를 이용하여 정제를 하고
있는데 잡 밴드가 넘 많아서 sds-page gel에서 단백질 정제를 하고자 합니다.
근데 sds-page gel에서는 단백질이 변성되어있는 상태이자나요(?)
이걸 가지고 antibody를 만들수 있나요? native gel로 해야하나???
그리고 gel로부터 단백질을 추출해 낼수 있는 방법좀 알려주세요...
감사합니다.

#sds-page gel에서 단백질 정제

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답변 1

답변등록

레벨8 엘피스
2007.06.21 09:06

항체는 아미노산 일차서열만 있어도 만들어 집니다. Denatured form을 가지고 만드셔도 되지만 구조적인 epitope을 인지하는 항체를 만드시고자 한다면 native form을 항원으로 사용하셔야 합니다. 

SDS-PAGE gel에서 단백질을 추출하는 것은 아주 쉽습니다. 10-50 mM Tris (pH7-8), 0.1% SDS가 포함된 용액에 gel slice를 넣고 잘게 부순후 짧게는 한시간에서 길게는 overninght으로 상온에서  diffuse시킨 후 상층액만을 얻어 이를 농축하시면 됩니다.

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