(급) cell stock 만들때.. | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q (급) cell stock 만들때..

cell culture 초보(비회원)

04.06.22 00:00
조회20795

 cell stock 만들기에 도전중입니다..

조성을 

10% FBS
10% DMSO
5% 페니실린
나머지 media
 
로 했는데,

FBS, DMSO, 페니실린까지 섞었을때 색이 뿌옇게 되면서 열이 나더라구요요..
이거 괜찮은 건가요?
cell이 제발 죽지 않기를... ㅜㅜ

#cell stock

Cell Biology > Cell Culture

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A 답변 5

레벨01 cell culture 초보 (비회원)
04.06.22 00:00

 세포배양할때 페니실린 넣어주는데요
그래서 stock만들때도 넣어준건데
stock만들때 페니실린 넣는게 아닌가요..?? 
그리고 벤치 안에 ice box 넣어도 되요? ^^;;;;;

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레벨01 답변 (비회원)
04.06.22 00:00

 저는 cell stock 만들때 ice box에서 만들거든요..^^

제가 하는 방법으로는 크게 이상없이 사용했는데요.
cell(in 10% FBS media) : FBS : DMSO = 5:3:2 비율로 사용합니다.
페니실린은 media만들때 넣었던 것이라서 따로 첨가하지는 않았습니다.
저는 이런 방법으로 tumor cell stock을 만들었고 이상은 없었습니다.
주의점은 cell pellet을 얻기위해 centrifuge를 돌릴 때 ice box에서
FBS : DMSO solution을 만들어주는데 이때 DMSO는 1ml pipet으로 방울방울
떨어뜨리고 tube를 잡은 손으로 계속 흔들어서 잘 섞이게 해주세요.
cell pellet은 media로 suspension해서 ice box에 꽂아두시구요...
아까 solution만드던 방법대로 동일하게 FBS:DMSO solution을 cell에 
방울방울떨어뜨리면서 반드시 잘 흔들어 주어서 섞이게 해야 합니다.
DMSO가 cell에 toxic하니까 한꺼번에 들어가지 않도록 주의하셔야 하구요. 
이렇게 cell:FBS:DMSO 전부 섞은후에 cryotube에 적당량씩 분주하고 
-80C에서 O/N후에 nitrogen tank로 이동하는 건 아시죠?

약한 cell이거나 DMSO를 10%로 맞추시려거든 FBS:DMSO solution만들때 media
로 다시1:1로 dilution하세요.그후에 cell(in media)과 다시 1:1 volume으로 
mix하면 되겠죠?

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레벨01 ^^ (비회원)
04.06.22 00:00

 저희는 freezing media를요~

RPMI 52.5%
FBS 40%
DMSO 7.5%

이렇게 만들어서 stock해요~^^;

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레벨01 bioman (비회원)
04.06.22 00:00

 RPMI1640 에 antibiotic antimycotic 넣으셨을 텐데요....
그리고, 경험상 FBS 양을 좀 늘리는 것이 좋더군요.
얼리는 과정은 isopropyl alcohol....

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레벨01 지나아빠 (비회원)
04.06.22 00:00

 cell freeze media를 제조하는데 
10% FBS, 10% DMSO에 나머지 media는 알겠는데 5% 페니실린은 왜 넣나요?
이미 만드신 media에 항생물질을 넣어주었을텐데...
더더구나 5% 라는 의미도 모호하네요.  
굳이 항생물질을 더 넣어줄 필요는 없습니다.