E.coli colony가 LB broth에서 안 자랍니다 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q E.coli colony가 LB broth에서 안 자랍니다

레벨01 타이레놀 (대학생)

26.08.27 13:53 (수정)
조회461

Cloning 후 Transformation하여 Amp 첨가한 LA plate에 도말하였고 다음날 colony를 확인하였습니다.

satellite 아니었고 그냥 colony 였습니다ㅜ.

LA plate도 7월 중순쯤 만든 Plate 였습니다.

Colony 개수도 그렇게 적지 않아, 바로 picking하고 Amp 첨가된 LB broth 에 O/N Inoculation하였으나 LB broth가 깨끗하더라구요..

혹시 저랑 비슷한 경험이 있으신 분이 계신다면 자문 좀 구하고싶습니다.ㅜㅜ

감사합니다

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A 답변 7

레벨06 bio (과기인)
26.08.27 14:01

agar plate에 transformation한지 1달이 지났으면 안자라도 크게 놀랍지는 않습니다.

다시 transformation하고 fresh한 colony pickup해서 LB에 inoculation해서 키워 보세요

답변리플

레벨01 타이레놀 (대학생)
26.08.27 14:16
질문자

제 말에 오해의 여지가 있었던 것 같습니다 !

agar plate를 만든 지 한 달 정도 되었다는 말이었습니다 ~ !

transformation은 이틀 전에 진행하여 agar plate에 도말했고 어제 colony picking후 inoculation 하여 오늘 LB broth으로 확인한 상태였습니다..!

레벨05 -_ - (과기인)
26.08.27 17:44 (수정)

LA plate를 새로 만들어보세요 (Ampicillin stock 새로 꺼내서)

답변리플

레벨08 강시 (과기인)
26.08.28 08:41

혹시 LA plate를 만들때, 너무 뜨거운 배지에 Amp 를 넣은 것은 아닌지, 그리고 Amp 을 넣은 후에 충분히 섞지 않고 plate에 부은 것은 아닌지 의심해 보세요.

Amp 은 열에 약합니다.

답변리플

레벨05 푸른고래 (과기인)
26.08.28 15:35

Amp 는 다른 항생제보다 잘 깨지는 경향이 있습니다. 배지 만든 지 시간이 좀 지났거나 제조 시 배지가 너무 뜨거울 때 Amp를 첨가했을 경우에도 그러하구요. 액체배지에서 자라지 않았다면 형질전환체가 아닌 것으로 생각되네요.

답변리플

레벨05 플로랑 (과기인)
26.08.30 00:21

Ampicilin 이 온도에 예민해서 깨졌을 수 있습니다.

카베니실린이 좀 더 안정하다고 듣긴 했습니다.

답변리플

레벨05 modulo42 (과기인)
26.09.02 08:49

몇 ml에 broth했는지와 균주에 상태가 어떠하였는지 두 가지를 보아야 합니다. 일반적으로 잘 자란다고 알려진 균주의 경우에도 Cloning 후에는 growth curve가 늦게 뜨는 것을 경험적으로 여러 번 관찰한 적이 있습니다.(하루만에 뜨던 것이 일주일 정도 걸릴 정도로 지연됨) plate에서 균주가 자라는 시간이 일반적인 시간대로 진행되었는지 확인이 필요합니다.

또한 scale up을 급하다고 과도하게 해버리면 균주가 환경 적응을 하지 못하여 죽는 경우도 있습니다. 제 경우에는 colony-5ml-100ml-1l-5l-20l-100l 순서로 단계적으로 진행했었습니다.