1. 마우스 폐 조직이면 두께는 파라핀이면 5-6 um, OCT면 8-12um정도가 보통일 듯 합니다.
2. adult lung이면 조직이 꽤 크니 fixation 후 lobe별로 다시 분리시킨 뒤 진행하는 방법도 있습니다.
3. 10% -> 20% -> 30% sucrose in PBS 각 스텝에서 조직이 잘 바닥에 가라앉은 것을 확인하셨는지?
4. 30% suc -> OCT 넘어갈 때 물기제거하지 말고 바로
30% suc와 OCT 를 1:1정도로(비율은 눈대중으로 너무 정확하지 않아도 됩니다) 잘 섞은 용액에 조직을 담군 후
둥근끝 핀셋으로 용액을 좀 이동시켜주면서 조직으로 침투하게 한 뒤에 (조직 크기에 따라 다르나 2-3분정도?)
Mold로 조직만을 옮겨서 OCT를 채우고 얼려보시면 어떨까요?
5. section이 말리는 문제는 자를 때 section 끝부분을 붓으로 잘 잡아주면 해결 가능합니다.
잡아댕기는 쪽말고 완전히 자른후반대쪽이 말릴기도 하므로 이 때는 레버돌리는 손도 빠르게 다른 붓을 집어 양쪽에서 펴서
양 끝쪽을 바닥 쪽으로 붓으로 천천히 지긋이 눌러주면 (찢어지지는 않게) 붓을 떼도 더 이상 안 말릴겁니다.
6. 마지막으로 해부시 4% PFA로 inflation은 하고 계신가요?
