Proteus 균 분리 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q Proteus 균 분리

레벨01 Manyull25 (대학생)

26.06.29 23:32
조회247

안녕하세요,
신생랩 석사생입니다.

현재 실험실에서 주기적으로 의뢰받은 시료에서 Proteus의 swarming 때문에 다른 균을 분리하지 못하는 상황이 있어 질문드립니다.

현재 의뢰는 원시료가 아닌 TSA plate 상태로 들어오고 있습니다. Plate에서 colony가 형성된 후 계대배양을 진행하려고 하면 Proteus가 빠르게 swarming하여 plate 전체를 덮어버려, 혼재되어 있을 가능성이 있는 다른 균을 분리하기가 매우 어렵습니다. Proteus swarming 보다 더 빨리 다른 균의 colony를 분리하려 자주 플레이트를 확인해도 proteus가 자라기 전에 안자라는 균들이 있어서 분리 배양에 어려움을 겪고 있습니다. ㅠㅠ

현재 찾아본 바에 따르면
1) agar 농도를 높인 TSA에서 swarming이 억제되기에 Proteus swarming을 막을 수 있다는데, agar비율을 2,3,4%정도로 높인 플레이트에서 확인 하는 방안
2) MacConkey agar와 high-agar TSA 에 동시에 계대배양하여 Proteus의 swarming을 억제하면서 다른 균을 분리하는 방법으로 해보려하는데 조언을 여쭙고싶습니다.

이와 같은 경우 일반적으로는 어떤 방법으로 다른 균을 분리하는지, 또는 더 적절한 방법이 있는지 조언을 부탁드립니다.

감사합니다

Microbiology > Bacteria

등록순
추천순

A 답변 6

레벨08 강시 (과기인)
26.06.30 09:23

이런 특성을 보이는 세균은 Proteus 만 선택배양배지를 사용하고 두 세 차례 계대배양으로 single colony isolation을 하면 쉽습니다.

배지에 3분 도말을 해서 잘 분리된 colony가 보이면 colony가 커지기 전에 빠르게 두 번째 배지에 streakin을 하세요.

이렇게 두 번만 하면 보통은 순수분리가 됩니다.

최종 분리된 colony로 Proteus 를 확인하세요.

Proteus vulgaris 처럼 urease-positive 라면 urease broth에 접종해서 확인하면 좋습니다.

답변리플

레벨01 Manyull25 (대학생)
26.06.30 09:51
질문자

안녕하세요 답변 감사합니다.

해당 답변을 통해 proteus만들 순수 분리하는 방법으로 이해했습니다. 다만
Proteus + ??? + ??? (특정 모르는 균)이 있을 경우, 그 미지의 균을 순수 분리하려면 어떤 방안으로 해야할지 여쭙고 싶습니다.

레벨08 강시 (과기인)
26.06.30 11:07 (수정)

특전 세균을 순수분리하는 것은 그 특정세균만 자라는 elective media를 이용하는 것입니다.

제가 Proteus에 대해서 잘 몰라서 그런 media가 있는지는 모르겠습니다.

그런 배지가 없다면, 그리고 어디서 Proteus 라고 받은 세균이라면 single colony isolation 후에 확인하면 됩니다.

제 기억에 모든 Proteus는 urease-positive입니다.

single colony isolation 후에 여러 colony를 urea broth에 접종해서 확인해 보세요.

6 시간 정도면 urease activity가 확인됩니다.

혹시 Proteus specific PCR primer가 있다면 PCR 확인도 해 보세요.

레벨01 Manyull25 (대학생)
26.06.30 13:39
질문자

제가 현재 목표로 하는 바는 proteus가 아닌 균을 얻고자 합니다 ㅠ
표준 tsa배지에서 콜로니가 proteus 포함 2종류 이상 보이는데, proteus가 퍼져있어 proteus가 아닌 균을 분리하는데 어려움을 겪고 있는 상황입니다.ㅈ자주 확인을 하면, proteus가 첫번째로 자라있다가 그 뒤에proteus가 아닌 다른 균의 colony가 형성 되어 자주 확인하는 방법으로도 어려움을 겪고있습니다.

레벨06 뭉이아빠2 (과기인)
26.06.30 18:51 (수정)

섞여 있는 애들을 dw나 pbs에 '단계 희석'해서 스트리킹 하지 말고 생각하고 있는 배지에 spreading해보세요.

희석배수 높은쪽에서 single colony 확인되면 pick해서 새 배지에 streaking해서 원하는 애인지 확인하면 될것 같습니다.

답변리플

레벨01 benrus (과기인)
26.07.02 15:49

프로테우스가 원치 않는 균이지만 배지를 덮어버리면 방해받기 일쑤이지요. AI 한테 물어보니 아래 답변이 나오는데...

원하는 균이 그람 양성이면 그람 음성인 프로테우스의 생장을 억제하는 MSA 배지 등을 사용할 수 있구요, CLED 배지는 경험이 없는데 권장하네요. 참고하세요.

CLED agar 사용 (가장 권장)
- CLED(Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient) agar는 전해질 농도가 낮아 P. mirabilis의 swarming을 효과적으로 억제합니다.
- 소변 검체나 혼합균 분리에 가장 널리 사용되는 방법입니다.
한천(agar) 농도 증가
- 일반적으로 1.5% agar 대신 2.0–2.5% agar를 사용하면 swarming이 감소합니다.
- 완전히 억제되지는 않지만 상당한 효과가 있습니다.
선택배지 이용
- 분리하려는 균에 따라 MacConkey agar, XLD, SS agar, CNA agar 등 선택배지를 사용하면 Proteus의 swarming이 감소하거나 다른 균을 선택적으로 분리할 수 있습니다.
반복적인 colony picking
- swarming이 시작되기 전에 작은 colony를 신속하게 채취하여 새로운 배지에 계대배양합니다.
- 여러 차례 반복해야 하는 경우가 많습니다.
항생제 또는 억제물질 사용
- 특정 연구 목적에서는 polymyxin B, p-nitrophenyl glycerol(PNPG) 등의 swarming 억제제를 사용할 수 있습니다.
- 다만 균의 생리나 다른 세균에도 영향을 줄 수 있으므로 연구 목적에 맞게 사용해야 합니다.
희석 후 도말(dilution plating)
- 검체를 충분히 희석한 뒤 도말하면 swarming이 시작되기 전에 다른 균의 colony를 얻을 가능성이 높아집니다.
Membrane filtration 또는 micromanipulation
- 환경시료나 임상시료에서 특정 균을 분리해야 하는 경우 사용할 수 있는 방법이지만 일반적인 실험실에서는 흔하지 않습니다.