wet 트랜스퍼 문제점 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q wet 트랜스퍼 문제점

레벨02 eeidjan (대학원생)

26.06.01 14:47
조회340

IMG_2707.jpeg (다운로드 : 9)

웻 트랜스퍼 문제점

찾아주시먄 감사하겠습니다..

페이버 각 두장씩, 샌드위치 기포는 빡빡 제거했습니다

0.35A 2시간 10분 , 중간에 아이스팩 한번 갈아주었습니다

v는 시작할 때 135쯤, 끝날 때 105-110v 였습니다

총 겔 4장을 트랜스퍼 했습니다 (가로로 두장씩)

기존에도 4장씩 했었는데 이런적은 없었어서 올려봅니다..!

Buffer/Reagent

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A 답변 13

레벨08 강시 (과기인)
26.06.01 15:20

어떤 문제가 있다는 거지요?

별 문제 없이 transfer가 잘 된것 같습니다.

답변리플

레벨02 eeidjan (대학원생)
26.06.01 18:47
질문자

아 죄송합니다 ! 제가 생각했을 때 문제점은 일단 75 마커가 넘어오지 않았으며, 폰슈 염색 결과 군데군데 기포 자국? 스펀지 자국 처럼 흔적이 있습니다 ..!

레벨05 depth (과기인)
26.06.01 15:22

단백질들은ㅇㄴ는 문제없이 잘 넘어간 것 같은데 어떤 문제가 있다는 걸까요?

답변리플

레벨02 eeidjan (대학원생)
26.06.01 18:48
질문자

레벨05 depth (과기인)
26.06.02 14:52

음 어떤 마커를 쓰셨는지 몰라서 75가 어디쯤 위치 했어야 하는건지 모르겠는데...

타겟 단백질이 75 근처인가요?

그리고 아래 빨간색으로 표시한 부분은 기포 같습니다.

기포는 초록색 스크래퍼 같은걸로 싹싹 빼준다음(불 빛 밑에서 보면 어느정도는 보여요) 다시 들춰보지 말고 바로 카셋에 넣어줘야 합니다.

레벨08 SPEED (일반인)
26.06.01 17:03

질문에 문제점에 대한 설명이 없습니다.

답변리플

레벨02 eeidjan (대학원생)
26.06.01 18:48
질문자

레벨02 leonardo30 (과기인)
26.06.01 17:43

transfer가 제대로 되지 않는 것 같으면 우선 gel을 staining 하여 남아 있는 protein이 있는지 확인해 보세요. 만약 남아 있는 것이 있다면 좀 더 시간이든 전압이든 늘려주고 gel에는 남아 있는 것이 없는데 transfer 된 양이 적은 것 같다면 원래 protein 양이 적었거나 가능성은 적지만 membrane을 뚫고 나간 것 아닌가 의심해보세요.

하지만 윗 분들 말씀 처럼 큰 문제는 없어 보이는데..