[Protocol] PFA perfusion 이후에 장기 별 4% PFA pos-fixation 조건 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q [Protocol] PFA perfusion 이후에 장기 별 4% PFA pos-fixation 조건

레벨01 kyeongtaek (대학원생)

26.05.04 16:27
조회156

안녕하세요. Immunofluorescence (IF) 실험을 계획하고 있는데요,

마우스 한 마리에서 Brain, Lung, Thymus, Spleen, Kidney, Liver, Heart - 총 7개의 기관을 모두 harvest 하여, IF 실험을 계획하고 있습니다. (실험 특성 상 위 기관들이 모두 필요해서요..)

지금까지 주로 brain IF의 경우 아래 실험 스킴대로 진행을 해왔습니다.
PBS + PFA serial perfusion -> 4% PFA post-fixation at 4℃ for O/N -> Dehydration in 30% sucrose for 2days -> OCT embedding -> Cryosection -> IF

헌데, brain 외 타장기 IF 경험은 전무하여 기관별로 PFA fix 조건을 얼마나 해야될지 고민하고 있습니다.

혹시 PFA fix 조건 및 기타 IF 실험 과정에서 주의해야 할 부분을 알려주실 수 있을까요?

감사합니다!

Immunology > Immunofluorescence

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A 답변 2

레벨01 SLAB (과기인)
26.05.07 14:59 (수정)

안녕하세요. 조직병리 이미지 분석 서비스를 제공하는 에스랩이라고 합니다.

문의주신 내용에 대하여 답변드립니다.

Q. PFA fix 조건 및 기타 IF 실험 과정에서 주의해야 할 부분을 알려주실 수 있을까요?

A. Sucrose 처리는 Brain 조직 밀도가 낮아 24–48시간 정도 소요될 수 있으나,
다른 장기의 경우 대부분 12–24시간 내에 충분히 infiltration이 완료되는 경우가 많습니다.
따라서 모든 장기를 동일하게 2일 처리하기보다는, 조직이 완전히 가라앉는 시점을 기준으로 진행하시는 것으로 의견 드립니다.

추가로 4% PFA에 Overnight 고정 하신다고 했는데 Brain 같은 큰 조직은 고정이 모두 완료되었는지 궁금합니다.

조직병리 염색은 결과로 이야기 하는 것이여서 최적의 염색 조건을 찾아야 하다보니 정답이 없는 경우가 많은 걸로 알고 있습니다.

Pre Test를 통하여 염색을 확인한 후 확인된 조건으로 본 실험을 진행하시는 것도 좋은 방법이 될수 있습니다.

관련하여 문의사항 있으시면 아래 연락처로 연락주시면 염색 책임자와 확인하여 추가 의견드리도록 하겠습니다.

추가로 폐사에서는 형광 이미지 분석도 제공하고 있으므로 내부 분석 과정에서 도움이 필요하시면 검토 부탁드립니다.

감사합니다.

주식회사 에스랩

043-233-2863

pathlab@naver.com