Rhod2나 Fluo4를 사용하면 되는 줄 알았는데 해당 시약을 검색해보니 모두 세포에서의 프로토콜만 존재합니다.. 또 이는 상대적으로 짧은 여기 파장이므로 조직 이미징에는 적합하지 않다는 논문도 있어, 혹시 마우스 조직에서 미토콘드리아의 칼슘 uptake를 측정할때 어떠한 방식으로 진행하시는지 조언 부탁드립니다.
정량적인 정확도를 높이고자 할 경우에는 Fura-2와 같은 ratiometric dye를 사용할 수 있습니다. 이 방법은 340/380 nm excitation ratio를 이용하여 Ca²⁺ 농도를 계산하므로 절대 농도 산출이 가능하며 photobleaching의 영향을 상대적으로 덜 받습니다. 다만 미토콘드리아 특이성이 낮기 때문에 permeabilized cell 시스템이나 분리된 미토콘드리아 조건에서 보완적으로 사용되는 경우가 많습니다. 또한 형광 dye 자체를 사용하지 않는 방법으로는 aequorin 기반 luminescence 시스템이 있는데, 이는 Ca²⁺ 결합 시 빛을 방출하는 단백질을 미토콘드리아로 타겟팅하여 매우 낮은 background에서 신호를 측정할 수 있는 장점이 있습니다. 그 외에도 연구실마다 여러 방법을 활용합니다.
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