colony pcr 전기영동 결과 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q colony pcr 전기영동 결과

레벨01 장균 (대학생)

26.02.27 10:34
조회272

현재 cloning 진행 중인데, ligation까지 완료하고 transformation 진행했는데 spreading 결과, 너무 떡진 것처럼 자라서 single colony로 colony pcr을 진행하지 못했고, 덩어리를 따서 colony pcr을 진행했습니다. 그 결과 다음 전기영동 사진처럼 아래쪽 연한 band가 관찰되어 이를 위양성 확인 plasmid prep을 진행하려고 전날 5ml culture 했는데 자라지 않았습니다...

1. pET vector를 썼기 때문에 5ml culture 진행할 때 kanamycin도 접종해주었는데 overnight 배양했는데도 자라지 않은 이유가 뭘까요..??

2. 전기영동 결과에서 맨 위의 진한 band는 gDNA로 의심된다는 얘기를 들었는데 균주는 E.coli(DH5a)인데 이는 kanamycin 저항성이 없는데 km 추가 배지에서 자란 colony에서 gDNA가 나올 수가 있는 건가요..? 아니라면 저 band가 무엇을 의미하는지 알려주시면 정말 감사하겠습니다..