[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
랩박스 - Neuroscience
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
전체보기 안전점검 논문교환
 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 421  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Trizol RNA 추출시 purity 개선~??
알파란하늘이(과기인)  |  02.27 23:49


안녕하세요.

Trizol로 균주에서 RNA를 추출하고 있습니다.

추출후 정량을 해보면 A260/280 = 1.35~1.60 정도 측정됩니다.

여러번 시도해도 유사한 결과가 나오내요.

어떤 방법으로 purity를 높여야 할까요~??

또, 정량농도는 약 100~150 ng/ul 정도 추출됩니다.

RNA 양과 Purity를 높일 수 있는 방법이 있을까요~?

RNA 추출 키트를 사용해 추출하면 Purity는 A260/280 = 1.85~2.0 정도로 적정하게

나오는데 양이 너무 적습니다. 

추출양과 purity 개선을 모두 충족해야 합니다.

경험 있으신분 답장 주시면 감사하겠습니다.








#RNA 추출
 
#Trizol
 
#purity 개선
답변하기
검색광고 검색광고
[(주)진올바이오테크놀러지] [BRIC 우수제품인증] 깨끗하고 순수한 RNA? 그럼 Ribospin ll
BRIC 우수제품인증(17-E0123) 획득한 바로 그 제품!! / 따로 구매할 필요없는 DNase l 기본으로 제공!! / 간편하게 On column 상에서 DNase l을 바로 처리!! / Bubble 없는 lysis buffer로 손쉽게 lysis 가능!! / RNA도 이제 column 방식! 써보세요! GeneAll의 Ribospin ll
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

TRIZOL 추출

- RNA 농도는 cell농도에 의존

- Purity : TRIZOL 처리 후 ice에 20~30분 냉각 후 13krpm, 15분 이상 원심분리

원심분리 후 sup의 max ~70%만 회수

SPIN column 추출

- RNA 농도는 cell 농도 및 elution 시 37도 15~20분 incubation 후 elution

그리고 총 elution vol.을 2회로 나누어 elution 

대왕개구리SPEED  |  02.28 00:02  

Trizol을 이용한 Phase separation방법은 Phenol성분 contamination때문에 높은 순도의 RNA를 추출하기가 어렵습니다.


kit방식을 사용했을때 RNA추출이 적게 된것은Lysis문제일 가능성이 높습니다. Trizol의 경우 강력한 Lysis능력으로 이런 부분을 극복하게 됩니다.


문제를 해결 할 방법은 두가지가 있습니다.


첫번째는 기존방법을 고수하되, 문제가 일어난 부분을 해결하는것입니다. 예컨대 Trizol 추출의 경우 이후 RNA Clean & concentrator같은 Clean up kit를 사용하여 순도를 높이는 방법과, kit추출의 경우 Kit사용전 Bead beater등을 이용해 확실한 Lysis이후 RNA를 추출하는 것이지요.


두번째는 두 방식의 장점을 합친 제품을 사용하는겁니다.
Direct-zol(http://www.kyongshin.com/productview.php?pd_id=96)이라고 미국 zymo사제품인데 Trizol샘플에서 RNA를 Column을 이용해 층 분리 안하고 추출하는 겁니다. 물론 Washing과정에서 Phenol성분은 제거되구요.

개구리A'ANE  |  03.04 10:43  
답변하기
할인행사 광고 검색광고
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
연구실 필수템 에펜도로프 피펫 원심분리기 PCR장비 세포배양기 특별 프로모션 (7.8까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
1/6  좌우
97,80078,000
668,600334,000
197,500158,000
82,800
121,700
305,000244,000
60,70049,000
254,100203,000
579,000463,000
243,800195,000
312,000250,000
59,70048,000
218,200
489,100
69,800
919,600736,000
49,700
118,500
762,200610,000
109,10087,000
253,900
130,00065,000
187,300150,000
24,900
최근등록   더보기 >
용액제조 관련 질문드립니다~   06.20
TLC관련 질문드립니다~   06.20
MTV/TM-011 breast cancer cell 증식속도, culture 사진 어떻게 되나요? 경험자   06.20
PK 시험용 혈청과 관련하여 질문드립니다.   06.20
3M 필름 이용 미생물실험 측정법 질문드립니다.   06.20
HPLC 분석 peak가 이상합니다   06.20
Truncate   06.20
MLE-12 cell line culture 관련   06.20
M9 최소배지   06.20
Pcr 분석   06.20
코리아바이오믹스
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아