실험 Q&A Cell Biology > Cell Culture
세포 배양 후 W/B을 진행하기 위한 실험에서 (12,24)well plate / 75T flask 선택관련입니다.
레벨2 carpediem1 (대학원생)
안녕하세요.
현재 세포 내 인산화 관련 실험을 처음 진행하고자 실험 설계를하고 있습니다.
아주 기초적인 질문이지만 여쭤보고 싶어서 혹시 비슷한 실험들을 하시는 연구원들 분께서는 어떤 방식으로 하고 계신지 궁금해서 질문드립니다.
보통 세포 배양 후 W/B을 진행하기 위한 최소 cell 양이 10^6cell 이상인 것으로 확인되는데, 이런 경우 실험조건이 다양하다고 하면 굳이 75T flask에서 배양을 해야 하는지 의문입니다.
접종된 세포의 양이 (12 또는 24)well plate / 75T flask 가 각각 동일하다는 전제하에
전체 실험 스케쥴을 3일 잡는다고 가정하면 (부착 1일, starvation 0.5일 또는 1일, 물질 처리 1일) 하나의 well plate 상에서 실험을 진행하고 실험이 끝난 후 세포를 회수해서 W/B을 진행해도 괜찮을까요?
비슷한 연구를 수행하시는 분은 플라스크에서 진행하고 계시는데 실험군이 많아 사용되는 플라스크의 양도 많아보여서 well plate에서 한꺼번에 왜 진행하지 않는지 여쭤보니 세포수득률이 낮아서 라고 하시는데 이해가 가면서도 한 가지 궁금한 부분을 해결할 방법이 없어 기초적이지만 여쭈어 봅니다.
그리고 추가적인 질문으로는 물질 처리 후 cold PBS buffer로 washing 후 세포를 떼어내는 방식이던데 제가 확인하고자 하는 실험이 AkT의 인산화 실험이라 트립신을 처리하게 되었을 때 인산화가 진행될 가능성이 있어보이는데 그냥 scraper로 긁어내는 방법이 맞는지도 추가적으로 여쭈어 봅니다.
감사합니다.
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