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질문 Transwell 실험
개구리Easternblot(대학원생)  |  2017.04.21 17:48
  안녕하세요

제가 Transwell 실험을 처음 하게되어 모르는 부분이 많아 여쭤보고자 합니다.

Transwell에 HaCaT을 seeding 을 하고 transcytosis 를 확인하려 합니다.

논문을 참고하여 24 well transwell에 5X10^4 cell을 seeding 후 monolayer를 이룰때까지 incubation하는데요, 

여기서 어떻게 monolayer를 형성했는지 확인하는 그 방법이 궁금합니다.

현미경으로 관찰할 경우 membrane 윗면이라 cell이 붙었는지 안붙었는지 구분이 안되네요..

그리고 완전히 monolayer를 형성하여서 protein을 apply하였을 때 그냥 pore로 빠져나가지 않는지 확인하는 방법이 있는지 궁금합니다.

1주일정도 되었는데도 media가 노랗게 변하지 않은 것으로 보아서는 membrane에 제대로 attach가 되지 않은 것 같습니다.

질문들 찾아보면 어떤분은 transwell coating이 필요하다고 하시고 어떤분은 요즘엔 필요없다고 하시는데 coating을 해야하는지도 알려주시면 감사드리겠습니다.


#transwell
#transcytosis
#hacat
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