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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 DMEM 배지 오염원 좀 알려주세요
알정선두(대학생)  |  03.20 21:46
 저희가 dmem배지로 동물세포를 배양하고 있었는 데 오늘 subculture하는 날이라서 아침에 배지를 확인했는 데 배지가 노란색으로 변해서 교수님께 여쭤보니 오염이 됬다고 하시면서 오염원을 파악해서 방안을 마련해서 오라고 하셨는 데 뭐가 오염원인 지 모르겠어요.
저희는 다음과 같은 과정으로 subculture을 했어요.

  1. Suction으로 배지를 제거했다.
  2. PBS을 5ml을 세포에 닿지 않게 조심히 넣어줬다.
  3. PBS을 Suction으로 제거했다.
  4. trypsin을 200㎕씩 여러 부분에 골고루 넣어줬다.
  5. FBS가 들어있는 배지를 5ml을 넣어줬다.
  6. 15ml conical tube에 옮긴후 cfg(13000rpm,3min)하고 상층액을 Suction으로 제거했다.
  7. FBS가 들어있는 배지를 5ml을 넣어줬다.
  8. Suspension을 pipeting으로 했다.
  9. cell 1.5ml와 새 배지 9.5ml을 100Ødish에 넣은 뒤 CO₂incubator에 배양했다.

    이 과정 중에 주의하지 않으면 오염이 될 수 있는 부분이 어떤 게 있을까요?
    지금은 배지가 문제인 거 같애서 배지를 10ml정도 100Ødish에 넣고 테스트중인데 배지가 문제가 아니라면 어떤 부분이 문제일까요?

    조금이라도 알려주세요...ㅠㅠ이 문제가 해결 안 되면 저희 세포 배양을 못 해서요.전문가분들 답변 부탁드립니다.

#DMEM 배지
#동물세포 배양
#DMEM 배지 오염
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
 교수님이 원인과 방안을 알아내서 오라고 하셨다구요?

골치아프네요. 가끔 원인을 알기 힘든 케이스(오염되서 버렸더니 다른건 정상이더라 라는 경우)도

있기때문이죠.

아마 교수님이 잘아시는 오염 케이스여서 그러신것 같은데 (오염의 원인이 의외로 구분이 가능합니다)

일반적인 체크로 오염의 원인을 제거하는식으로 나가야 할것 같습니다.

우선 인큐베이터 냄새를 맏아보고 오염이 어느 수준인지 (cell문제인지 인큐베이터 청소가 안되어서

인지 구분) 구분하는거로 인큐베이터 청소를 결정하셔야 할겁니다.

만약 인큐베이터 냄새가 이상(빵냄새?)하면 우선 청소를 하시고 같은 cell을 풀어서 인큐베이터

문제가 아니라는걸 증명하는 겁니다.

그리고 인큐베이터는 깨끗한데 cell을 풀었더니 이상하게 동일한 문제라면 cell stock 제조날짜를

보고 조절해보는겁니다. 이미 오염된 cell을 저장한것일수 있으니까요

만약에 저런 방식을 교수님이 거부하신다면 좀더 직접적인 방법이 있습니다

현미경과 연결된 컴퓨터로 오염된 cell 사진을 구하시고

그 사진을 기준으로 미생물 오염인지 박테리아 오염인지 등으로 나뉘고 그에 대한 검사 kit를

구입후 검사하는것으로 무슨 오염인지 밝혀내는겁니다. 물론 해결방안은 위의 방식으로

해야 할겁니다. 왜냐하면 어느 곳에서 그 원인이 발생한건지는 알아내야 하니까요...

인큐베이터 내 cell의 오염은 대게 청소가 잘 안되었을때 발생합니다. 사용하는 시약은

대게 깨끗하게 핸들링 하니까요... 기본적인 시약 오염체크만 하시고(부유물이 있다든지 색이

이상하다던지 등의 체크) 인큐베이터 체크부터 하시기 바랍니다.
석사졸업생  |  03.21 11:45   
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