[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
BRIC을 시작페이지로 회원가입    로그인
BRIC실험
   
통합검색
배너1 배너2 스폰서배너광고 안내
오늘의 BRIC정보
모바일 BRIC RSS
트위터 페이스북
검색 뉴스레터 안내
좋은 연구문화 만들기
Bio일정
Bio일정
 
Bio일정 프리미엄(유료) 등록이란?
2017년 5월달 Bio일정을 확인하세요.
실험
실험
바이오 형광사진
실험의 달인들
동향리포트
평가단 모집
Bio마켓
Bio마켓
BioJob
BioJob
Biojob 프리미엄(유료) 등록이란?
커뮤니티
커뮤니티
멸종 위기의 학문생태계
전체메뉴
대메뉴안내: 실험
실험 QnA 안전점검 논문교환
프로토콜 이벤트
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 161  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 세포 단백질 lysis 과정 관련하여 질문드립니다.
알분홍이(과기인)  |  03.20 19:42
 안녕하세요.
cell line에서 lysis buffer를 이용하여 단백질을 용출하고 있는데
궁금한 점이 있어 질문드립니다. 

1. cell pellet 만을 얼렸다가 다음에 해동하여 
lysis 하여도 상관없는지요?

2. cell pellet에 lysis buffer을 첨가하여 ICE에서 30분간 두면서 중간중간 vortexing 해주고 
원심분리(17000rpm, 30분) 을 돌려서 lysate인 상등액만을 수거하였습니다.
그런데, 다 가라앉지 않고 debris가 남아 있는 경우가 있는데 이거는 무엇일까요?
cell 같기도 하고, 깨지지 않은 cell이라면 분명히 원심분리 시 가라앉아야 할텐데....
 lysis buffer에 문제가 있을까요?

3. 그리고, debris를 제거하기 위해서
0.4 micrometer filtering을 해도 되나요?
0.22 micrometer filter도 사용가능한가요?

4. cell lysis buffer 의 용량은 150mm dish  기준 최소 얼마가 필요할까요?
제가 본 논문에 따르면 1x10^8 에 2ml을 사용하였던데요
-- 고수님들 답변 부탁드립니다. 감사합니다. 


















#cell lysis
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
1. Yes
2. Cell이 아니라 insoluble debris입니다.
3. 0.22 um filter 해도 되지만, 보통 centrifuge만으로 debris는 어느 정도 제거가 됩니다.
4. 이건 cell 종류에 따라, downstream 목적에 따라 달라지겠죠. 그래도 원활한 lysis를 위해서라면 150-mm 한 장 당 최소 500 ul는 필요할 것 같습니다.
청개구리Lucid  |  03.20 22:30  
답변하기
할인행사 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
PhileKorea(필코리아)의 시원한~ 할인행사!!★매일 추가업데이트 됩니다! (5.31까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
Advantage 행사:피펫4+1+1이벤트/전자피펫/디스펜서/원심분리기/Mixer/PCR장비/분광광도계 특별한 혜택! (7.6까지)
최근등록   더보기 >
gene mapping이랑 alignment랑 개념을 모르겠어요.   04.27
fat 에서 SVF 분리후 정량적으로 확인할 수 있는 방법...?   04.27
rapamycin(sirolimus) 갖고 세포 실험해보신 분?   04.27
mounting 후 기포가 많이 생깁니다. 도와주세요.   04.27
Cell signalling Ab 어떻게 dilution 하시나요?   04.27
HPLC 분석시 베이스라인이 올라갑니다.   04.27
클로닝 6년차.. 갑자기 안 되네요. 이유가 뭘까요?   04.27
RNA 추출 시 장기간 보관방법   04.27
cryosection 과정   04.27
H&E staining 할 때 post fix과정   04.27
나노브릭
나노브릭 스폰서배너광고 안내
투표진행
Q. cell centrifuge 돌리실 때 몇 도씨에서 돌리시나요?
참여하기
제품평가
[엘에스바이오]
MyPCR
엘에스바이오
모집인원: 30명
모집기간: ~4/28까지
신청조건: BRIC 회원
평가자 혜택
- 참가자 전원 3만원 상품권
- 우수평가자  5명에게 3만원 상품권
제품평가자 모집중
ZEUS
이전페이지로 돌아가기 맨위로 가기
 

BRIC 홈    BRIC 소개    회원    검색    문의/FAQ    광고    후원
Copyright © BRIC. All rights reserved. Contact member@ibric.org