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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 세포 단백질 lysis 과정 관련하여 질문드립니다.
알분홍이(과기인)  |  03.20 19:42
 안녕하세요.
cell line에서 lysis buffer를 이용하여 단백질을 용출하고 있는데
궁금한 점이 있어 질문드립니다. 

1. cell pellet 만을 얼렸다가 다음에 해동하여 
lysis 하여도 상관없는지요?

2. cell pellet에 lysis buffer을 첨가하여 ICE에서 30분간 두면서 중간중간 vortexing 해주고 
원심분리(17000rpm, 30분) 을 돌려서 lysate인 상등액만을 수거하였습니다.
그런데, 다 가라앉지 않고 debris가 남아 있는 경우가 있는데 이거는 무엇일까요?
cell 같기도 하고, 깨지지 않은 cell이라면 분명히 원심분리 시 가라앉아야 할텐데....
 lysis buffer에 문제가 있을까요?

3. 그리고, debris를 제거하기 위해서
0.4 micrometer filtering을 해도 되나요?
0.22 micrometer filter도 사용가능한가요?

4. cell lysis buffer 의 용량은 150mm dish  기준 최소 얼마가 필요할까요?
제가 본 논문에 따르면 1x10^8 에 2ml을 사용하였던데요
-- 고수님들 답변 부탁드립니다. 감사합니다. 


















#cell lysis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
1. Yes
2. Cell이 아니라 insoluble debris입니다.
3. 0.22 um filter 해도 되지만, 보통 centrifuge만으로 debris는 어느 정도 제거가 됩니다.
4. 이건 cell 종류에 따라, downstream 목적에 따라 달라지겠죠. 그래도 원활한 lysis를 위해서라면 150-mm 한 장 당 최소 500 ul는 필요할 것 같습니다.
청개구리Lucid  |  03.20 22:30  
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