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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
조회 571  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Bacillus subtilis에서 단백질 발현해보신 분 계신가요
알lhj1394(대학원생)  |  2017.03.20 17:39
 Bacillus subtilis에서 효소 발현 실험을 진행중입니다.

형질전환까지 성공을 했고, colony PCR로 밴드 확인까지 했는데요.

extracellular 로 protein이 나와야 하는데, SDS 상으로 밴드 확인이 어렵고 효소 활성 확인도 해봤는데, 발현이 안되는 것 같아요 ㅠ

Bacillus에서 extracellular protein으로 실험 해보신 분들의 조언을 구합니다..

1. 형질전환 시에, plasmid가 chromosome에 붙는 위치마다 발현이 될수도 있고 아닐수도 있나요?
형질전환 시 뜬 모든 콜로니를 발현하여 확인해야 하는지 궁금합니다.

2. SDS 상으로 밴드를 확인할때, 농축을 해야만 밴드가 확인된다면.. 수율이 낮은 것 같은데 ㅠ
원래 그런가요? 아니면 농축하지 않아도 배지상에 있는 프로테인 양으로만 SDS로 디텍이 가능한걸까요? 발현이 안되서 그런건지.. 원래 그런건지 잘 모르겠네요.

조언해주신다면 감사하겠습니다...!!!
#Bacillus
#expression
#extracellular protein
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
 1 효소 자체가 extracellular인지 intra인지 부터 확인
2 bacillus에서 사용 가능한 protein expression vector 쓴거죠?
 |  2017.03.21    

대장균 발현시에는 당연히 intra였구요
bacillus subtilis용 expression vector 사용했습니다. (amyQ가 signal peptide로 붙어있는 벡터입니다)

알lhj1394  |  2017.03.22   
 대장균에서 intra면 바실러스에서 발현 안됩니다. Only extra~

p.s. 대장균에서도 intra면 발현 후 정제하기 까다로운거 아시죠?
host만 변경했다고 intra가 extra로 바뀌지 않습니다
첫 답변자  |  2017.03.24    
 

벡터 자체에 signal peptide가 있는데도 발현이 안되나요?

대장균에서는 intra였지만, 바실러스 벡터로 옮기면 signal peptide가 붙어있기 때문에

secretion 된다고 생각했는데, 아닌가요?

ㅠㅠㅠㅠ
알lhj1394  |  2017.03.24   
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