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레벨5
어쩌구저쩌구
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15.04.25 14:37
약물 처리 전에 세포를 미분하게 seeding 해야 합니다.
세포를 다시 깔아서 3일동안 배양 한 후에 CCK-8 처리해 보세요.
만약 전부 비슷한 값이 나온다면 문제가 없는 것입니다.
그리고 엣지효과가 있으니 바깥부분의 well은 사용하지 마시고 PBS 같은 것으로 채워 주세요.
답 감사드려요. 3일이나 배양해야 하나요? 저는 15000씩 주는데요, 하루 지나도 80% 정도 차있더라구요.
추가 질문을 cck처리 이후에 시간이 어느 정도 지나고 측정을 하는게 좋을지요..
2시간 했는데, 혹시 너무 긴건 아니었는지..
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레벨5
어쩌구저쩌구
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15.04.28 08:35
배양일은 세포에 따라 다를 수 있습니다.
세포의 double time시간이 긴 경우 4일간 처리 하기도 합니다.
그리고 CCK-8 처리 시간도 세포에 따라 다르게 처리합니다.
Control을 OD 2.0이하로 조절 하는 것이 좋습니다.
제 생각에 2시간 정도로 처리 하셔도 될 듯 보입니다.
거즘 5년 후에나 답변을 하네요. 저도 CCK-8 처리를 하는데 비슷한 문제가 반복되길레 여러모로 고생 좀 했었습니다. 저는 cancer cell로 약물처리하여 항암력을 알아보려고 하였는데요.
1. 위에 선생님께서 말씀하신 seeding문제. Seeding이 문제가 된다면 control 값이 전부 다 다르게 보이게 될 것입니다.
2. 약물처리 과정에 있어서 저희는 샘플 처리 후 팔렛이 보이기에 관련 논문을 찾아보다가 약물 처리 후 Suction을 한 뒤 추가 배지와 CCK를 넣었더니 안정적인 결과가 나왔었습니다.
제가 이용했던 프로토콜은 cell volume을 10,000으로 잡고 96well에 12시간을 CO2 5% incuvation하고 약물처리 후 24hr을 또 incuvation 했습니다. 그 다음 suction 후 배지 100ul 와 CCK-8 10ul을 넣었습니다. 2시간 incuvation 후 분광측정을 했습니다.
5년이 지난 답변이지만 이런 문제가 발생하여 찾아보시는 선생님들께 많은 도움이 되길 바랍니다.