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[별별소리] WBC분리 피콜법 고수분들 해답좀 주세요 ㅠㅠ
회원작성글 elflsl
  (2019-02-11 10:30)

제가 PBMC를 분리하려고 피콜법으로 실험을 하고 있는데, 원심하고 나면 피콜층이 더럽게 나와요..
피브린이나 지방이 낀것처럼 나오고 RBC가 중간중간 껴있어서 PBMC층만 따도 washing하면 RBC가 섞여있네요..

도대체 왜 이렇게 나올까요?? 피콜층위에 혈액(PBS+heparin 혈액)올릴때도 섞이지 않게 잘 올렸고, 원심은 400g 30분 했습니다.. 
사진 첨부합니다. 둘다 공복에 채혈했고, 각각 다른 사람 혈액입니다. 지금까지 여러번 실험해본 결과 첫번째 사진이 가장 깨끗한 편이고 두번째사진이 가장 심한 경우였습니다. 

피콜법 잘 아시는분 좀 도와주세요 ㅠㅠ 

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태그  #ficoll   #PBMC
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  댓글 3  
....  (2019-02-11 10:56)
1
RBS가 깨져서 그런 것 같은데요. 제 경험 상으로는 fresh한 혈액, 채혈 직후 잘 흔들어서 heparinization이 잘 일어난 혈액일 수록 결과가 깨끗한 것 같습니다.
그런데, 피콜층이 포함되지 않은 중간 경계면의 층만 분리해야하는 건 아시죠? 경계면만 잘 파이페팅하시면 피콜층이 지저분한 건 결과에 영향을 주지 않을텐데요.
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회원작성글 elflsl  (2019-02-11 12:57)
2
경계선까지도 지저분하게 RBC가 껴있어서 경계선만 따도 그러네요 ㅠㅠ
heparin tube의 유통기한이 지나서 그럴 수도 있겠네요. 조언 감사합니다.
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....  (2019-02-13 11:41)
3
원심분리기에 accel, decel 낮춰서 천천히 올라가고 천천히 떨어지도록 하는 것도 중요했던것으로 기억해요 층분리가 정확하게 이루어 지지 않았다면 저것도 확인해 보심이...
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