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질문 Enzyme inhibitor의 IC50 구하는 방법?
박동현  |  2009.01.15 02:27
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
IC50을 구하려고 하는데..

보통 IC50의 정의가 maximal enzyme activity의 50%를 억제하는 약물의 농도라고 적혀 있던데.. 여기서 activity라는 것은 반응후 나온 product의 양인가요 아니면 enzyme velocity입니까?

전자라고 (enzyme activity = [Product]) 라고 한다면,

일정량의 enzyme과 substrate와, 다양한 농도의 inhibitor을 넣고

product 발생량이 control의 50%가 되는 inhibitor 농도를 구하면 되나요?


후자라고 한다면,

일정량의 Enzyme에 몇가지 농도의 inhibitor와 substrate을 넣고

(inhibitor 농도가 100, 10, 1, 0 이고 substrate농도가 100,10,1 이라면 sample 갯수는 4*3=12개가 되는..)

여기서 initial velocity (V0) 및 Vmax를 구한 뒤

V0를 Vmax의 50%까지 억제하는 inhibitor의 농도를 구하면 되나요??

http://www.curvefit.com/inhibitors.htm
의 글과 구글검색을 참고해서 생각한 것인데요. 다른 분들은 어떻게 하시는지??

검색해보니 방법이 조금씩 달라서 혼동이 되서 정말 맞는 방법이 무엇인지 질문드립니다.

전자의 방법으로 하다보면 약물농도를 아무리 높여도 inhibition이 50%도 안되는 경우가 생기기도 하고 해서 혹시 후자가 아닌가..싶어 질문드립니다.

#IC50 enzyme inhibitor
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
IC50는 specific activity, umol/min/mg 또는 relative activity, % 또는 그냥 activity umol/min 등..약간씩 차이가 있습니다. IC50는 단순히 standard assay condition (substrate는 포화농도) 에서 활성이 절반 나올때의 inhibitor 농도를 의미하기 때문에, 활성을 어떤 단위로 표시해도 무관하다고 생각됩니다. 하지만 님께서 특정 저널에 발표하실 거면, 그 논문에서 추구하는 활성단위에 맞게 고쳐서 그래프를 그리시면 됩니다. 어떤 단위를 써도 IC50값은 동일하기 때문이죠..님께서 설명하신 전자에 해당한다고 생각됩니다...

그런데 Ki (inhibition constant 또는 dissociation constant)를 구하는것은 좀 더 복잡한 과정을 거쳐야 합니다. http://en.wikipedia.org/wiki/Enzyme_inhibitor 에서 보시는것 처럼 inhibition mechanism에 따라 크게 3종류로 구분되면, 이때는 기질이나 inhibitor가 unsaturated 에서 실험해야 하며, 님께서 후자에 설명하신 방법으로 실험을 해서 그래프를 1/v, 1/S로 fitting합니다. 이때 각 mechanism에 맞는 fitting 식이 있는데, 이걸 계산하려면 특정 프로그램이 필요합니다 (origin이나 그냥 sigma plot에서는 계산못합니다). 원래 이 분야에 대가인 W.W. Cleland란 사람이 만든 프로그램을 썼는데, 요즘은 Sigma plot에서 보면 enzyme kinetics란 모듈을 부가적으로 판매하는데, 이걸로도 fitting할 수 있습니다. 도움되시길...
분홍개구리TX  |  2009.01.15   
둘다 그냥은 못구하십니다. IC50은 전자가 맞는데 님의 말과 유사하게 보통 인히비터 농도를 아무리 올려도 엔자임을 100% 억제를 안하는 것으로 실험결과가 나올 때가 많습니다. 그러므로 실험으로는 50%는 구할 수가 없죠... 둘다 커브피팅을 해야 구할 수 있고 엑셀 같은 것으로 만들 수 있습니다. 커브피팅을 하기 위해서는 그에 필요한 이론식을 먼저 알고 계셔야 합니다. IC50을 구하는 이론식이 몇개 나와있는데 그 중에 하나를 찾아서 쓰시면 될 것입니다.
-_-;  |  2009.01.21    
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