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질문 genomic DNA
알z크핫z(대학생)  |  07.12 17:09
첨부파일 파일첨부: 질문.PNG (86 KB)
이미지 첨부파일

안녕하세요 저는 새내기 대학원생입니다.

MDA-ME 231 로 genomic DNA추출 후 1% 전기영동을 하고 보니 밴드가 깨지진 않았지만 흐르는 현상이 있었습니다. 브릭에 질문을 하고 답변을 듣고  다시 해 보았으나... 제가 쓰는 건 AccuPrep-Genomic-DNA-Kit  이거 이고요 과정중에 흰색의 머리카락 처럼 엉켜있는 것을 볼수가 있는데요 이것을 풀어줘야 하나요 아니면 조심히 그래로 실험을 계속하면 되나요.  친구에게 물어보니까 흰 가닥이 gDNA라고 했습니다. 맞나요?

 

사진을 보면 맨 위에는 밴드가 뜨는데 연하게 뜨며 밴드가 깔끔하지 않습니다... ㅜㅜ

#gDNA
 
#genomic
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

첨부 사진 처럼 나오면 gDNA가 분해되어 분리된것입니다.

조금 더 전체 과정을 mild하게 진행하는 것이 좋습니다.

gDNA는 분자량이 크기 때문에 EtOH 침전을 하면 실처럼 침전이 되고

dry 후 DW나 buffer에 녹이면 다 녹을 때까지 시간이 조금 걸릴수 있습니다.

손으로 tube를 친다든지 충격을 주지말고 DW나 buffer를 넣고 냉장고에

1시간 이상 넣어 두면 다 녹기 때문에 다 녹인 후 잘 피펫팅 해서 전기영동

으로 확인해 보면 됩니다.

혹시 Lab에 페놀 buffer가 있나요?

저는 kit를 잘 사용안하는 편인데 mannual로 gDNA를 잘 뽑을수 있는 방법을

알려드릴까 합니다.

필요하면 답변주세요..

대왕개구리SPEED  |  07.12 19:00  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Bioneer사의 kit 사용하시는거같은데 해당kit를 저희 실험실에서도 사용합니다.

근데 컬럼 방식의 kit라서 딱히 흰색 실? 같은게 생성될게 없습니다.

DNA prep의 문제라 생각되시면, 다시한번 시도해보심이 어떨까요?

 

그리고 전기영동시에 loading buffer 양을 줄여보세요 (D.W 희석하시면 됩니다)

loading buffer가 DNA에 비해 너무 많이 들어가도 아래쪽에 background가 생깁니다.

이드  |  07.13 09:42   

DNA 10ul + loading buffer 2ul 로 해서 전기영동 내렸습니다. ㅠㅜ

알z크핫z  |  07.15 09:41  

speed 님 그러면 실 같은것을 다음 washing buffer을 넣고 시간을 두고 난 다음에 실험을 해도 괜찮을까요? ㅜㅜ 여기 kit는 wahing을 2번 하는데 두번다 시간을 두고 실험을 해야 하나요? ㅠㅠ

알z크핫z  |  07.15 10:35  

washing은 연속으로 하는게 좋습니다.

그리고 실같은 것이 정확히 어느 단계에서 생기나요?

대왕개구리SPEED  |  07.15 18:51  
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