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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western시 transfer 문제
올챙이써니22(대학생)  |  06.18 19:22

안녕하세요 석사를 마치고 연구원으로 막 취업한 학생입니다. 

새로운 연구실에서 western을 하는데요,

transfer과정에서 60V 380ma 1시간 30분동안 transfer를 하는데요,

(invitrogen transfer kit 사용)

transfer가 잘 되다가 40분쯤 지났을때, volt랑 ma 창이 번갈아 뜨면서 

기계가 에러가 걸린것 같더라구요 ... 

그래서, 기계를 멈춘 후 다시 buffer를 조금 더 붓고, 

다시 50분간 transfer를 진행했습니다. 이때는 기계문제 없이 잘 진행이 

되었는데, 갑자기 다른 연구원 선생님꼐서 이상한 냄새가 나는것 같다하여 

가보니, 나프탈렌 냄새가 나더라구요 ... 

그래서 바로 transfer를 멈추고, membrane은 blocking을 하였는데,

transfer시 그런 냄새가 날수 있나요? 

사실, 저의 실험에서 난 냄새인지는 잘 모르겠는데.. 왠지 그럴수도 있다는

생각이 들어 걱정이 많이 됩니다...

얼음 탱크에 담궈서 진행해서, 밖 버퍼는 차가웠고, membrane과 스폰지들만

좀 뜨거운 상태였습니다. 

실험결과가 너무 걱정됩니다...ㅠㅠ 

 buffer를 차갑게 쓰지 않고 오늘 실험 전 바로 만들어서 얼음에 담궜다가 

썼는데, 그게 문제가 될 수 있을까요.

답답하네요... 

#western
 
#transfer
 
#error
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

인비트로젠 툴로 60V 트랜스퍼는 너무 높습니다. 기준보다 두배정도 높게 쓰고 있습니다. 열발생이 심하게 일어날 것입니다.

트랜스퍼 전에 멤브레인을 왜 블락킹을 하는지 모르겠지만 열에 의해서 단백질이 타는게 아닐까요? (블락킹은 트랜스퍼가 끝난 다음에 하는게 정석입니다)

인비트로젠 툴의 메뉴얼을 다시 읽어보시고 인스트럭션을 따르기 바랍니다.

 

꽃개구리visavis  |  06.18 23:59  
Transfer 가 끝난후 blocking을 시켜뒀다는 말이었는데 제가 표현을 잘 못했네요ㅠㅠ
감사합니다! Vol 를 줄여서 해봐야겠네요!
올챙이써니22  |  06.19 06:43  
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