[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
웨비나 모집
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > etc.
조회 104  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Hydroxyproline assay 관련 질문 드립니다.
알평창군꽃등심(과기인)  |  06.18 17:18

안녕하세요. 저희 연구실에서 Collagen 함량(순도) 테스트를 하기 위해 Hydroxyproline assay를 하고 있습니다.

sample은 Fish skin에서 collagen을 추출하여 TFF 필터 후 동결 건조한 collagen 을 사용하였고, Hydroxyproline assay결과 100mg collagen 에서 2mg의Hydroxyprolin(2%) 함유 되어 있다는 결과가 나왔습니다.

실험 방법은 100mg collagen을 6N HCl에 녹인 후 autoclave하여 sample로 사용 하였고 Oxidant Sol. , Ehrlich's Sol. 각각 500ul씩 사용 하여 흡광도 체크 하였습니다. Standard도 매 실험마다 다시 잡고 하고 있구요. 

다른 논문 및 자료들을 봤을때 collagen (type 1)에는 10~13%의 hydroxyproline이 함유 되어 있다고 하는데 실험 결과 수치(2%)가 너무 낮아서 문의 드립니다...

#Hydroxyproline
 
#Collagen
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 100mg collagen을 6N HCl에 녹인 후 autoclave하여 sample로 사용 하였고

: 위의 방법에서 hydroysis 시간은 어느정도 하고, 충분히 hydrolysis가 되는

조건인지 method validation이 되어있는 방법입니까?

아마도 collagen hydrolysis가 많이 되지 않았을 겁니다.

 

대왕개구리SPEED  |  06.18 17:26  

protocol 상 120℃ 3시간 heating하여라 라고 적혀 있어서 autoclave의 time설정을 3시간으로 변경하여 사용하였습니다. Standard 발색 및 흡광도 커브가 잘나왔고 수치가 낮다는 것은 hydrolysis가 덜 되었다고 봐야 되는 건가요?

알평창군꽃등심  |  06.18 17:44  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 현재 제조한 콜라겐 함량 자체가 낮을 경우 Hyp 함량이 낮게 나올수 있지만

이 가능성은 낮을 것 같습니다.

2. acid hydrolysis 조건은 110도 24시간에서 145도 4시간 사이입니다.

120도, 3시간은 아마도 많이 부족할 겁니다.

STD가 잘 나온다는 것은 assay에는 문제가 없으니까 아마도 시료 내

free-Hyp 함량이 낮아서 그런것 같으며 acid hydrolysis 조건 문제가 아닌가

합니다.

acid hydrolysis 조건에 대한 validation을 해봐서 99% 이상 hydrolysis가 일어

나는지 확인 후 실험에 적용해야 할 겁니다.

대왕개구리SPEED  |  06.18 17:51  
답변하기
할인행사 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
PCR의 새로운 혁명! Bio-Gener 런칭 BIG EVENT!! (12.24까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
3/6  좌우
79,80076,000
218,200
118,500
50,50048,000
151,300144,000
130,00065,000
107,200102,000
144,900138,000
121,700
49,700
69,800
231,000219,000
56,70054,000
253,900
489,100
113,500108,000
101,90097,000
668,600334,000
24,900
123,900118,000
180,700172,000
82,800
137,600131,000
231,000219,000
최근등록   더보기 >
제발요ㅠ간단한항균실험   07.15
에임즈 테스트에 대해서 질문하고 싶습니다   07.15
이 곰팡이 무슨종류인지 아는 분 있나요?   07.15
cell contam   07.15
급합니다..   07.15
raw 264.7 cell subculture 할 때 density를 얼마정도로 해야하나요??   07.15
frozen section 후 IF 염색 전 washing 단계(?)   07.15
bacillus genomic integration   07.15
algae toxicity test OECD 201   07.15
질소건조 관련문의합니닷   07.15
Springer Nature
투표진행
Q. 산타크루즈 primary 앤티바디 유효기간은 언제까지일까요
참여하기
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS