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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 E coli가 아닌 strain에서 단백질 발현 방법
알YKim(과기인)  |  06.13 01:24

여러가지 박테리아를 사용하여 overexpression test를 계획중입니다.

E. coli에서는 T7 등의 commercial promoter system으로 단백질발현이 가능하지만, 그닥 유명하지 않은 균주를 사용해도 T7이 작동할까요?

첫번째 질문은

만약 pET vector를 사용한다면, 새 균주의 RNA polymerase가 pET vector에 잘 작동할 것인가입니다.  작동하지 않는다면 RNA polymerase도 벡터에 함께 넣어줘야 하는것인가요?

두번째 질문은

BL21(DE3) 가 아닌 균주에서 IPTG induction 은 분명 안될것으로 생각되는데, 최근에 해 보았던 테스트에서는 pET vector + IPTG가 작동을 하더군요.  lactose를 사용하는 균주라면 BL21(DE3)가 아니라도 T7 + lac operator 가 작동하는것으로 생각해도 되는것인가 입니다.

 

제 전공분야를 좀 벗어나니 많이 버벅댑니다. 도움 감사드립니다. ^__^

#프로모터
 
#wild type strain
 
#iptg
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

pET vector를 E. coli외의 균주에서 단백질 발현용으로 사용하려면

1. pET vector의 ori.가 발현 균주에서 인식이되어야 합니다.

2. T7 RNA polymerase가 생산 되는 균주이어야 합니다.

IPTG 유도는 promoter 문제가 아니라 LacO 조절 영역과 LacI의 product 간의

문제입니다.

따라서 BL21(DE3)가 아닌 균주에서 pET vector가 작동하려면 균주에서

T7 polymerase가 생산되면 가능합니다.

대왕개구리SPEED  |  06.13 01:58  
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