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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
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질문 cloning할때 dna purification을 할 때 왜 cut한 vector는 gel purification을 하고 insert는 PCR purification을 하나요?
알hooo(과기인)  |  05.14 01:45

cloning 할때 dna purification을 할 때 왜 cut한 vector는 gel purification을 하고 insert는 PCR purification을 하나요?

#PCR purification
 
#gel purification
 
#pcr
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

cloning 시 사용하는 vector와 insert의 정제는 불순물 종류에 따라

권장하는 정제방법이 달라집니다.

1. vector

- 1 cut해서 사용하는경우

: EtOH 침전만으로 사용가능, gel elution해도 무방

- 2cut해서 사용하는 경우

: 짧은 2cut 단편을 제거하기 위해 gel elution을 권장

2. insert

- vector에서 잘라내어 사용하는 경우

: gel elution을 권장

- PCR 증폭으로 사용하는 경우

: 비특이 band가 없는 경우는 PCR 정제 kit를 사용하여 미량 남아있는

primer와 buffer 교환.

: 비특이 band가 일부 있는 경우는 gel elution하여 target band만 정제하는

것을 권장.

대왕개구리SPEED  |  05.14 11:31  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

만일 벡터나 insert를 제한효소롤 잘랐을때 잘려서 나오는 작은 DNA 조각이10 bp 정도라면 그냥 PCR purification kit를 사용합니다.

왜냐하면 PCR purification kit의 메뉴얼을 읽어보면 kit의 레진에 결합해서 정제할 수 있는 DNA의 크기범위가 나옵니다. 너무 작은 DNA는 레진에 결합했다가 wash 단계에서 제거되기 때문에 마지막으로 elution된 것은 작은 DNA 조각을 포함하지 않습니다.

물론, 이 방법은 벡터나 PCR product를 잘랐을때 잘려져 나온 불필요한 DNA 조각이 클 경우에는 적용하지 못합니다.

대왕개구리강시  |  05.14 12:54  

감사합니다~!!

알hooo  |  05.14 15:03  
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