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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 luciferase 발현하는 stable cell 제작
알djsmswja(대학생)  |  03.14 18:10

암세포에서 luciferase를 발현하는 stable cell을 제작하고 있습니다.

stable cell을 제작한 이후에 이 세포에서 P53 관련 실험을 하려고 하는데요.

1. 제가 가지고 있는 luciferase cDNA에 CMV와 SV40이 들어있습니다.

SV40이 transfection 이후에 P53을 inactivation해서 세포가 계속 성장하게끔하는 것으로 알고 있는데요. 이 cDNA로는 P53을 분석하기가 적합하지 않은 건가요?

 

 

2. SV40이 들어 있지 않는 luciferase cDNA를 찾고 있는데요.ㅠㅠ

EF1a promoter를 갖고 있는 cDNA를 lentivirus particle 상태로 판매하는 곳이 있더라구요. 이 것으로 P53을 분석하는게 적합할지... 궁금합니다.

 

 

P.S. 제가 가지고 있는 luciferase cDNA에서 SV40을 제거하는 cloning을 진행중인데 잘 안되네요..ㅠㅠ

 

 

#luciferase
 
#P53
 
#SV40
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1. 제가 가지고 있는 luciferase cDNA에 CMV와 SV40이 들어있습니다.

: vector에 luciferase + pCMV + SV40이 들어 있는것이 아닌가요?

luciferase cDNA에 CMV와 SV40이 들어있는것이 아니라..

2. SV40이 들어 있지 않는 luciferase cDNA를 찾고 있는데요.

: 현재 가지고 있는 luciferase gene을 PCR로 증폭해서 다른 vector에

넣어 사용하면 됩니다.

대왕개구리SPEED  |  03.15 18:01  

cDNA와 plasmid의 용어를 혼동하고 계신거 같습니다만

p53과 Rb를 inactivation하는 것은 SV40 large T antigen입니다.

SV40 LT를 발현하는 plasmid는 primary cell cell immortalization에 이용되며 일반적인 plasmid에는 포함되지 않습니다.

아마도 plasmid에 흔히 들어있는 SV40 promoter 혹은 SV40 poly(A)를 보고 

SV40가 들어있다고 생각하신게 아닌가요? 
 

올챙이무광  |  03.17 04:24  
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