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질문 예비 석사 약물희석 serial dilution 질문입니다 꼭 답변해주세요ㅠㅠ부탁드려요
알eujin0842(과기인)  |  02.12 15:21
첨부파일 파일첨부: serial dilutioin 질문.PNG (12 KB)
이미지 첨부파일

bEnd.3 cell (endothelial cell) 에 MG (methylglyoxal, 독성물질) 을 처리하여 MTT assay를 하였는데 자꾸 세포가 하나도 안죽습니다ㅠㅠ
그래서 약물 희석 (serial dilution) 에 문제가 있나 하여 제가 하는 방법이 맞는지 질문드립니다 ㅠㅠ

제가 cell 에 처리할 농도는 MG 0,250,500,750,1000uM 입니다.
MG solution 농도는 ~40% in H20 6.49M 이며 100mM 로 1000ul 을 만들었습니다.
nv=n'v' 를 이용하여
MG 15.41ul + DW 984.59 ul =1000ul 의100mM 을 만들었습니다-- 100X stock

100X stock 을 표에 나와있는 것 처럼 각 tube 당 DW를 먼저 넣고, 100mM 튜브 vortexing 한번 후 225ul 을 따서 75mM 튜브에넣어 vortexing 하고 75mM에서 또 200ul 을 따서 25mM 튜브에 넣고 vortexing 을 하였습니다 . 그리고 제가 원하는 농도는 1/1000 dilution 이고 100ul 씩 triplicate 할거라 여유롭게 총 볼륨을 400ul 로 맞춰 각 tube에서 stock 4ul를 따서 media 396ul과 섞어  250,500,750,1000uM 을 만들었습니다.

이렇게 해서 MTT assay를 네번 진행했는데 세포가 하나도 죽지 않고 오히려 더 자랐습니다. 약물희석방법에 문제가 있는지 여쭤보고 싶습니다.. 알려주시면 정말 감사하겠습니당 ㅠㅠ 

#MTT assay
 
#약물희석
 
#serial dilution
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

6.49M을 0.1M로 희석하는 것은 원액 15.4ul + 984.6ul입니다.

그 이후 75mM, 50mM, 25mM 희석은 정상적입니다.

대왕개구리SPEED  |  02.12 15:58  
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