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 전체 > Chemical biology
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질문 cholesterol assimilation 관련 실험 질문드립니다 ㅠㅠ
알리드(대학생)  |  02.12 10:27

안녕하세요 새로운 실험을 배우고 있는 석사과정 학생입니다.


실험실에서 처음으로.. cholesterol assimilation 실험을 진행하고 있습니다.


MRS배지에 water-soluble cholesterol과 oxgall을 첨가하고 미생물을 배양하여 해당 균이 얼마나 cholesterol을 흡착할 수 있는지 확인하고 있습니다.


33% KOH와 ethanol을 배양액에 첨가하여 섞어주고, 37도에서 15분간 반응시킵니다.
반응이 완료되면 water와 hexane을 첨가하여 다시 잘 섞어주고, 질소가스를 이용하여 hexane을 증발시켜 줍니다.
다음 초산에 녹인 o-phthalaldehyde를 첨가하고, 황산과 반응시켜 흡광도를 측정하게 됩니다.

위와 같은 프로코톨로 실험을 진행하고 있는데, positive control로 사용 중인 아무것도 배양하지 않은 배지에서와 균을 배양한 배지에서 같은 흡광도 값이 나타나고 있습니다..

몇몇 논문이나 프로코톨을 살펴보니.. positive control 같은 경우 콜레스테롤이 함유되어 있기 때문에 적자색이 나타나야한다고 하는데.. 제 실험에서는 모두 약한 노란빛을 띄고 있습니다... 


질소가스를 사용한 농축과 phthalaldehyde 시약, 초산 등을 의심하고 있는데.. 관련실험을 진행해 본 선배들이 없어서 조언을 구할 수도 없는 상황입니다.


관련실험을 진행해보신 분들이 계시다면 조언 부탁드립니다.. ㅠㅠ


감사합니다.

#cholesterol assimilation
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