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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 CRISPR/Cas9을 이용해서 E.coli 조작 해보신분??
알YUMmYUMm(대학생)  |  02.09 17:52
대학교 연구실에서 CRISPR/Cas9 시스템을 이용해서 E.coli genomic DNA 내의 유전자들을 Knock out하는 과정에 있습니다.


타겟으로 하는 유전자가 여러개 존재하는데, 같은 플라스미드를 이용하고 sgRNA와 Homology arm을 넣어주어 recombination이 일어나도록 진행하고있습니다.


몇몇 유전자는 KO이 성공하였는데 다른 유전자들이 KO되지않아 혹시나 sgRNA의 디자인이 문제가 있지 않을까 싶은데.... 


같은 방법으로 modification 해보신분 계실까요??


플라스미드는 Addgene의 pCas와 pTargetF 를 이용하고있습니다.
#CRISPR
 
#knockout
 
#크리스퍼
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

multi target으로 sgRNA design한 것이라면

single target으로 하는 것보다는 효율이 좋지 않을 것 같습니다


singleplex PCR하는 것과

multipelx PCR하는 것의 효율 차이처럼요

histone  |  02.09 20:20   
multi target 아니고 타겟 하나하나마다 sgRNA 디자인해서 넣어주었습니다!
알YUMmYUMm  |  02.10 21:46  

유전자가 뭐냐에 따라 효율성의 차이가 납니다.
효율이 떨어지는 경우 저는 두세번 Knock out시켜서 수행했는데, 괜찮았습니다.
한 유전자씩 시도해서 차근차근 넣는 것이 확실하게 만드는 방법이긴 한데, 시간이 많이 필요합니다.

ㅒㅒ  |  02.14 00:12   
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