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질문 HPLC에 100%DW만 흘리면 압력이 무지막지올라가요ㅠ
알마댕댕이(대학생)  |  02.08 15:14
LC를 이용해서 피크별로 나눠서 항산화 활성을 찍으려고 단일펩타이드 얻으려고하는데
이동상 : Acetonitrile(0.1TFA), 100%D.W
컬럼 : 250X10.0mml.D. S-5 um,12nm TA12S05-2510WT Ser.No.117BA70125
이렇게인데 Iso pump의 벨브를 열고 컬럼쪽이아닌 바로 갈색병에 나오도록 하고 Acetonitrile(0.1%TFA)만 흘리면 압력이 0bar인데 D.W만 흘리면 400bar가 넘어가버립니다.(max pressur 400으로 설정해놨어요)
D.W 전용필터로 필터하고 소니케이션이용해서 탈기도하고 병도 씻어보고 하는데 압력이 자꾸 max를 찍어서 에러가 뜨네요 ㅠㅠㅠ이유좀 알고싶습니다.
#HPLC
 
#HPLC D.W
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column으로 흘려주면 압력이 올라가는건 당연한데 column이 아닌 waste쪽으로

흘려주는데 압력이 올라가는 것은 line에 문제가 있는건 아닌지 모르겠네요..

대왕개구리SPEED  |  02.08 15:44  

펌프 모델은요??

개구리cslee  |  02.09 12:24  

1. 먼저 LC grade water를 사용하고 계신지 궁금합니다. pressure가 높아지는 것을 방지하고 싶다면 LC grade water를 사용하더라도 0.2 마이크로필터로 필터링한 후에 디게싱하여 사용하는것이 좋습니다. (이렇게 사용하더라도 다시 따뜻한곳에서 수일간 방치되면 water가 혼탁해지는 경우도 있습니다. water는 유기용매와 달리 자주 갈아주면서 사용해주시는것이 좋습니다.)

2. acetonitrile 100%로 컬럼에 흘릴경우에는 압이 낮다고 하니 컬럼이 문제는 아닐듯 합니다. 기기안에 air가 낀것도 아닌것 같고요. 그런것이 아니라면 water 100%에 elution되어져 나오는 물질들이 많아지면서 압이 높아지는 경우도 있습니다. 이러한 경우는 일시적으로 워싱이 되면서 압이 높아지더라도 차차 다시 낮아져야 정상입니다.

먼저 전자의 경우를 생각해보시길 바랍니다.

영란쏭  |  02.10 16:03   

제 경험상 영란쏭님 말씀처럼
water를 필터해주니까 괜찮아졌던 기억이 납니다.

꽃개구리착한사람  |  02.13 11:44  
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