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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 OD 측정값이 아무 것도 안 했는데 계속 떨어지는 이유가 대체 뭘까요?..
알홍삼(대학원생)  |  02.07 12:04


제가 큐벳에 PBS + sample 을 450:50 비율로 넣고 OD600 값을 측정했습니다.


밑에 버블이 없는 것도 확인 했고요. 큐벳은 총 3개였습니다.


여기까진 좋았는데, 측정값이 처음에는 1.9~2점 대에서 몇 분이 지나니까


1.5점 대로 떨어지더니, 나중에는 1.2까지도 떨어지더라구요...

한 5분 정도 지나니까 아예 0.9~1로까지 떨어지던데 원래 값이 떨어지는 게 정상인가요?


제가 한 거라곤 BLANK 설정한 후에 샘플을 꽂아넣고 계속 측정 버튼만 눌렀을 뿐인데요...

실험 결과 내야 되는데 조금 당황스럽네요;
문제가 뭘까요??

#Optical Density
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

샘플의 입자가 계속 가라앉아서 그런거 아닐까요? 균주 OD 측정할 때 저런 현상이 발생합니다.

꽃개구리Applied_Microbe  |  02.07 13:32  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
정상적인 현상이며 불용성 시료(미생물 균체 등)의 경우 중력에 의해 시간이 갈수록

아래로 내려가기 때문에 OD값이 내려갑니다.

시료가 균등하게 분포된 상태에서 바로 OD값을 측정하면 됩니다.
대왕개구리SPEED  |  02.07 13:42  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

stirring 하면서 측정하시면 일정하겠는데,,,

개구리cslee  |  02.07 14:51  

저도 침전되는 것 때문에 측정값이 낮아질 거라는 건 예상 했습니다만..

이렇게 큰 폭으로 감소할 줄은 몰랐네요.

측정하기 전에 흔들어 보기도 했는데, 초기 값에 닿을 정도로 측정값이 다시 높아지진 않더라고요..!

다음부턴 피펫팅이라도 다시 하면서 해야 할까봐요..

알홍삼  |  02.07 17:18  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

너무 강하게 혼합해서 액상 배지 내부에 기포가 발생했을 경우 비슷한 상황이 벌어질 수 있습니다. 배지의 점성이 강하거나, 혼합을 너무 강하게 할 경우 액상 배지에 기포들이 다량발생 할 수 있으니 주의하세요

꽃개구리Applied_Microbe  |  02.07 18:03  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

앞서 답변하신 분들이 말한 것 처럼 시간이 지남에 따라 cell 이 가라 앉으면서 OD 값이 감소하는 것이 아닌가 예상됩니다. Cell 의 크기가 크거나 무게가 무겁다면 더더욱 그럴 가능성이 큽니다.


그리고, OD 를 2 까지 측정하시는 것 같은데,
Spectrophotometer 의 측정 한계 때문에 그렇게 높은 농도의 시료는 OD 값의 정확도가 떨어집니다.
일반적으로 시료를 OD 범위 0.2-0.7 사이가 되도록 희석하여 측정 후 dilution factor 를 곱해서 환산하게 됩니다.
OD 가 0.5 일 때 cell 수가 10개라고 OD 가 2.0 일 때 cell 수가 40 개라 할 수 없다는 의미입니다.


다름 링크들의 OD vs Cell number relationship 그래프를 참고해 보세요.


http://simulab.ltt.com.au/4/laboratory/personalstudy/psEstimatBactNoIndirMeth.htm


http://www.biologydiscussion.com/bacteria/growth-of-bacteria/growth-of-bacteria-with-diagram-microbiology/50151

꽃개구리Kozmoj  |  02.08 06:12  
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