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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 blocking 할 때 skim milk를 사용하는 이유와 원리가 궁금합니다.
알DAKI(대학생)  |  01.11 16:19
blocking 할 때 skim milk (non-fat) 을 쓰는 이유가 fat이 blocking을 방해한다고 하는데, 정확히 어떤 원리로 방해하는지 알 수 있을까요? 


membrane에 fat이 항체보다 먼저 붙어버린다거나 등등 이런식으로 자세하게 알고싶은데 아무리 검색해봐도 안나오네요 ㅠㅠ 답변 기다리겠습니다 ㅎㅎ
#skim milk
 
#western blot
 
#non fat
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Blocking 성분은 membrane과 결합을 합니다.

fat은 단백질 성분보다 membrane과의 결합력이 낮기 때문에 blocking 능력이 떨어져

back ground가 전체적으로 발색이 됩니다.

간혹 자료를 찾아보면 일반적인 WB의 경우 skim milk와 BSA 모두 사용한다는 연구자도

있고 BSA만 사용한다는 사람도 있는것 같습니다.

그리고 Casein을 구성하는 phosphoprotein 때문에 phospo-protein을 검출할 경우 BSA만

사용한다는 연구자도 있는 것 같습니다.


대왕개구리SPEED  |  01.11 16:30  
예전에 지도교수로부터 들었던 이야기인데
Prokaryotic cell의 단백질을 이용한 실험에서는 skim milk를 이용해서 blocking한다고 들었었습니다
꽃개구리Applied_Microbe  |  01.11 19:46  
웨스턴브라팅은 멤브레인에 옮겨진 단백질 밴드중 항체가 결합하는 단백질 밴드만을 확인합니다
항체도 단백질이라서 멤브레인에 골고루 달라붙습니다.
단백질 밴드에만 항체가 붙고 나머지 배경에는 항체가 붙지않아야 실험이 되겠죠.
항체를 처리하기전에 스킴 밀크나 BSA 를 처리하면 멤브레인 전체에 nonspecific 단백질인 BSA나 스킴밀크가 코팅되서 항쳬가 붙을 빈 공간을 가려줍니다
이것이 블라킹입니다.
스킴밀크는 지방을 제거한 유단백이고 BSA는 혈장단백이며 쉽게 대량으로 얻을 수 있는 값싼 단백질이어서 실험에 사용합니다.
단, BSA에는 인산기가 많이 붙어 있어서 인산화단백질을 검출하는 항체에는 사용하면 안됩니다.

답변을 쓰다보니 오류가 있어서 정정합니다.
단, BSA에는 인산기가 많이 붙어 있어서 인산화단백질을 검출하는 항체에는 사용하면 안됩니다.
를 아래와 같이 정정합니다

단, 스킴밀크 단백질에는 인산기가 많이 붙어 있어서 인산화단백질을 검출하는 항체에는 사용하면 안됩니다.

대왕개구리강시  |  01.12 16:45  

Casein

: Casein (/ˈksɪn/ "KAY-see-in", from Latin caseus "cheese") is a family of related phosphoproteins (αS1, αS2, β, κ).

BSA 대량생산 system을 개발했는데 BSA는 phosphoprotein family에 속하지 않는걸로

알고있습니다.

대왕개구리SPEED  |  01.12 17:07  
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