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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 pET vector를 이용한 protein induction
알manuna(대학생)  |  01.10 19:57

안녕하세요


pET vector를 사용해서 원하는 단백질을 induction 조건을 잡고


Large scale로 불리는 과정중에 있습니다.


Novagen에서 제공하는 pET system에서는 induction 후 


어떤 buffer를 사용해야 할지에 대해서 나와있지 않아 여기에 문의를 드립니다.


gel staining을 통해서 protein양을 확인하고 Protein을 정제하고자 하는데,


이때 cell에서 extraction시 사용하는 buffer와 Lysis할때 사용하는 buffer를 어떤걸 


사용하면되는지 알려주시면 감사하겠습니다.


또 Novagen이외에의 protocol이 있다면 추천해주시면 감사하겠습니다.

#protein
 
#pET
 
#induction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

맹물을 사용해도 단백질이 soluble하게 유지되고 대장균이 잘 터진다면 맹물을 사용해도 됩니다.
하지만 아무리 유명하게 단백질 정제에 고빈도로 사용하는 buffer라도 내 단백질의 solubility를 떨어뜨리거나 enzyme activity를 잃게 한다면 사용할 하등의 이유가 없습니다.
논문이나 회사의 프로토콜에서 제시하는 buffer를 몇개 골라서 small scale로 사용해 보시고 맘에 드는 적당한 것을 사용하세요.
보통은 그냥 phosphate buffer만 사용해도 되는 경우가 많습니다.

대왕개구리강시  |  01.10 20:07  

lysis buffer는 기본적으로 정제버퍼중 평행버퍼와 동일 조성을 사용하면 됩니다.

Novagen이나 Qiagen이나 binding buffer(평행버퍼)의 조성이 크게 다르지는 않습니다.

https://www.qiagen.com/mx/resources/resourcedetail?id=79ca2f7d-42fe-4d62-8676-4cfa948c9435&lang=en

위에 링크는 qiagen의 Ni-NTA 정제에 대한 protocol 입니다.

참고하시면 좋을것 같고 정제 buffer 조성도 같이 있고 참고될 다른 내용도 많이 있습니다.

금개구리안재진  |  01.11 13:14  
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