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질문 cell 배지 교체 가능한가요? DMEM->RPMI
앞다리wkfgkrhtlvek(대학원생)  |  2018.12.04 14:08

HT-29 cell 키우는데 한국세포은행에서는 RPMI로 하라고권장했습니다

근데 다른논문들보니 DMEM 에서도 잘 자라더라고요

제가 이번에 cytokine 실험 예정인데

sample 처리할때 srume free 배지를 사용해야하는데

RPMI는 srume free가 없어서요

혹시

sample 처리할때 seeding 은 RPMI으로 하고

sample 처리시 Srume free 배지 DEME 으로 사용해도되나요?

아니면 차라리 FBS 처리된 RPMI 로 sample 처리하는게 나을까요?

#cytokine
 
#DMEM
 
#RPMI
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

한국세포주은행에서 분양 받은 세포인가요?

이런 질문에는 솔직히 정답은 없는데... 저라면은 지금 조건에서 실험하겠습니다.
DMEM에서 잘 적응하고 있고 다른 논문도 관련 조건을 언급한 상태에서 배지 적응도 안한 상태에서 배지 변경은 이득이 없을 것 같습니다.

그러나 DMEM이나 RPMI나 특수 배지 들은 아니니 배지 적응만 시킨다면 배지 변경도 가능하겠죠...

이건 질문자가 선택해야 할 답인듯 합니다.

금개구리안재진  |  2018.12.04   

안재진님 감사합니다

그럼 sample 처리할때 혈청이 포함된 배지를 사용해도 괜찮은가요??

보통저는 serum free 배지를 사용했었습니다...

앞다리wkfgkrhtlvek  |  2018.12.04   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

지금 처리하는 sample의 종류를 모르기 때문에 뭐라 말을 드리기가 어렵네요...

제 실험이라면 basal level이 되는 조건을 먼저 탐색하겠습니다.
무슨 말이냐면 내가 특정 유전자의 발현 양상을 보겠다고 하면 논문 혹은 실험으로 특정 유전자가 최소화 발현이 되는 조건을 잡아야 겠죠...
이상태에서 내 sample이 들어가 유전자 발현을 올릴때 내 가설과 실험이 맞는 실험이 되겠죠

또 내 실험에서는 오랜 시간을 두어야 한다면 serum이 없다면 힘들겠죠... 보통 collagen 단백질 발현양을 볼때는 serum이 있는 상태에서 3일 정도를 두기도 합니다. 이럴때는 serum이 필요하겠죠...

이런 조건을 잡는건 일단 타 논문을 확인하시고 내가 직접 조건을 잡아야 할것입니다.
빠른 반응이라면 1% 미만의 FBS에서 진행하셔도 괜찮을것 같습니다. 그러나 시간이 늘어 난다면 serum 없는 상태가 셀 자체에는 스트레스 이기 때문에 적절한 serum 농도가 필요할것입니다.

금개구리안재진  |  2018.12.04   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
제가 전에 이 세포와 배지에 대해 답변을 달았던 기억이 있네요 ㅋㅋ
http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=634107

제가 배지를 변경하라고 답변을 드렸을 때는
세포를 키우다가 바꾸는게 아니라 stock에서 풀 때부터
해당 배지가 적용이 되어야 한다는 개념이었어요 ^ ^
왜냐면 실험은 여러 변동 사항들이 발생하지만
기본적인 부분은 동일한 방법이 적용되어야 하거든요

처음부터 배지를 DMEM으로 사용할게 아니라면
현재 RPMI 1640으로 진행하시구요
RPMI 1640 serum free 배지 얼마 안 합니다 ^ ^
구매해서 사용하세요~ 
전 THP-1 세포로 실험을 진행할 때 RPMI 1640배지를 주로 사용했었는데
시그마에서 분말을 구매해서 직접 만들고 필터링 하고 항생제를 넣어서
사용했었어요. 아마 파는거 많을꺼에요~

그리고 실험할 때 약물처리 실험이면 serum free로 진행 해 줘야 합니다.
특히 신호전달을 보는 경우라면 더더욱이요~ 그럼 수고하세요!
개구리Q.E.D.  |  2018.12.04   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
저는 QED 답변과는 조금은 다른 의견입니다.

media adaptation은 배지를 잘 안가리고 잘 자라는 경우가 아니라면 순차적 적응이 맞을것으로 생각합니다. 100, 75 50, 25, 최종 0까지 adapation하면서 가는게 맞고 각각의 단계에서는 생존률이 80~90%는 되는것을 확인하는게 필요하다고 합니다.
물론 한번에 변경해도 잘 자라는 세포는 있습니다.

또 일반적으로 면역세포는 RPMI에서 배양하는게 정설처럼 되어 있기도 합니다. 그러나 내가 처음도 아니고 다른 논문도 있다면 굳이 변화가 필요할지도 생각해볼 필요는 있을듯 합니다.
배지의 기능은 세포를 원형성질을 유지하면서 잘 자라게 하는게 목적이 있습니다. 많은 연구 그룹에서 DMEM을 이용해서 실험을 진행했다면 그 자체로도 확인은 된 세포배양법이라 생각합니다.

마지막으로 serum free starvation은 항상 진행되는 것은 아닙니다. 실험자에 따라서 2%, 1%, 0.5% 를 주기도 합니다. 특히 ELISA 실험을 진행할때는 일반적인 qPCR처럼 초기 시그널을 보는것이 아니기 때문에 적절한 FBS의 농도 탐색은 필요하다고 봅니다.


위 모든 조건은 어느 하나의 실험 조건이 아니라 실험자가 적절히 예비실험후 결정해야 할 문제라고 생각합니다.

금개구리안재진  |  2018.12.04   
안재진님 안녕하세요 ^ ^
실험은 실험자가 스스로 생각하고 예비 실험들을 거쳐서 바꿔나가는게 맞기에
저도 안재진님 의견에 어느정도 동의하는 편입니다.
다만, 전 제가 답변한 질문들에 대해 어느 정도 기억을 하고 있습니다.
그리고 세포를 이용해서 실험을 한 논문만 상위10% SCI논문이 4편 있고
다른 논문들도 가지고 있어서 답변을 할 때는 질문자분은 그런걸
생각하지 않으셨다 하더라도 그 부분을 리뷰어가 봤을 때 지적하지 않을까?
하고 생각하는 경향이 있습니다.
위 부분은 논문에 쓰게되면 충분히 지적받을 상황이구요....

그리고 질문 제목은 DMEM에서 RPMI로 배지 변경이 가능하냐고 물어본 거지만
현재 작성자분이 세포를 키우고 있는 배지는 RPMI 1640입니다.
그리고 해당 세포가 DMEM에서 잘 자란다는 건 저도 알고있고
이미 제가 논문들을 찾아봐서 질문자님에게 답변을 했었구요 ^ ^
그리고 지금 DMEM으로 배지를 변경하겠다고 한 부분은 샘플처리시입니다.
그러면 그 결과를 어떻게 신뢰를 하나요 ㅠ.ㅠ
세포를 키우는 조건이 그 부분에서 바뀌는 건데요....
그래서 기존에 사용하고 있는 RPMI 1640 serum free를 사용하라고 답변을 한 거에요 ^ ^

아래 질문들을 보면 질문자 분이 아직 세포 실험에 익숙하지 않은게 보입니다.
이 질문들을 통해서 이 분 실험이 어떻게 진행되고 있는지 조금은 알 것 같구요
총체적으로 고려해서 답변을 한 거라서 의견이 다를 수 있을 꺼에요 
(질문자분 디스하는게 아니니까 오해하지 말아요>_<//~♡)
모쪼록 날은 춥지만 다들 재미나게 실험하세요!!

http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=634614
http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=639970
http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=634107
http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=633467
http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=633638
개구리Q.E.D.  |  2018.12.05   

질문자보다 QED 님의 답변을 보고 제가 더 많이 배우는것 같습니다.

또 이렇게 서로의 의견을 주고 받을수 있는것 때문에 이곳 Q/A 사이트가 좋습니다.

QED 님도 좋은 실험하시고 이런 의견 답변 앞으로도 많이 부탁드립니다.

감사합니다.

금개구리안재진  |  2018.12.05   
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