실험 Q&A Cell Biology > Transfection
luciferase reporter gene assay관련해서 질문있습니다
레벨1 qwerty11 (대학원생)
논문 본문에 나와있는 내용입니다.
RSK2+/+ (5x10^3 cells/cm^2) and RSK2-/- (5x10^3 cells/cm^2) MEFs were transiently transfected with 400ng each of a pAP-luciferase, pNF-kB-luciferase, or pCOX-2-promoter luciferase reporter plasmid with 20pg of the phRL-SV40 Renilla luciferase reporter plasmid in 24-well plates.
RSK2+/+에 pAP-luciferase, pNF-kB-luciferase, or pCOX-2-promoter luciferase reporter plasmid 각각을 따로 transfection하고, RSK2-/-, MEFs에도 마찬가지로 각각을 따로 transfection한다고 하면
1. 각 세포에 transfection한 pAP-luciferase, pNF-kB-luciferase, or pCOX-2-promoter luciferase reporter plasmid에서 AP, NF-kB, COX-2-promoter 모두 프로모터 부위만을 이용해서 luciferase reporter gene 실험을 한 것이 맞나요?
2. 위의 그래프에서 빨간색으로 표시된 부분이 차이가 나는 이유가 RSK2-/-세포에서 bFGF 성장인자 신호가 없을 때 다른 신호전달 경로에 의해 COX-2 발현보다 AP-1발현에 더 영향을 미쳐서 발현량이 차이가 있다고 생각해도 되나요? (AP-1이 COX-2의 전사인자이므로 상위 신호전달이라서RSK2-bFGF신호전달외에 발현에 영향을 미치는 다른 경로가 더 있다고 생각했습니다.)
아니면 위 아래가 AP-1, COX-2 각각에 대한 전사량을 나타내는 그래프이기 때문에 빨간표시가 되어있는 부분에서 나타나는 차이를 고려하지 않아도 되나요? (이 질문에 대한 supplyment 자료를 오른쪽 그래프에 넣었습니다.)
3. 2번처럼 생각한것이 틀리다면 왼쪽 그래프와 오른쪽 그래프를 어떻게 관련지어 해석해야 되는지 알고 싶습니다.
설명부탁드립니다. 감사합니다.
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