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 전체 > Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
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질문 Facs) fixed cell 을 이용한 apoptosis 확인
알연구원나부랭이(과기인)  |  09.12 11:13
안녕하세요 
현재 BD사의 Annexin V & PI double staining kit를 이용하여 
facs로 apoptosis를 확인하는 실험을 하고 있습니다. 

저희 회사에 장비가 없어 협약된 학교에서 실험을 할 수 있는데 
cell sample을 가지고 1-2시간 이동하다보니 
그 사이에 세포들이 손상되어 측정값을 제대로 구할 수 없더라구요 

그 전에 pi staining으로 cell cycle을 찍을때는 다행이 fix 과정이 있어서 가능했는데...

혹시, 아래의 방법을 알려주실 수 있을까요 ?
 1) Annexin V & PI double staining 시 fix 하는 방법 or 프로토콜
 2) 다른 apoptosis 확인법 (facs 장비이용)

실험 고수님, 박사님, 연구원님들 부탁드립니다 ^^
#apoptosis
#flow cytometry
#fixation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
 거친 방법이긴 하지만, PI만으로 staining 해서 cell cycle 분석을 하면, sub-G1으로도
대략적으로 necrotic cell death 와 apoptotic cell death 를 구분할 수 있습니다..
죽을 때 DNA가 부서지는 방식이 다르기 때문에요..

그리고 A-V와 PI로 staining을 하시고 A-V binding buffer에 1-4% 농도의 파라포름알데하이드를
섞어서 고정시키는 방법이 있습니다..

그런데 정말 추천드리는 방법은 아니고 그렇게라도 실험을 해야 하는 상황이라면 저런 방법을
쓸 수도 있다 정도입니다.
...  |  09.12 15:29   
...님 감사합니다. 
A-V binding buffer에 1-4% 농도의 파라포름알데하이드를 고정시키는 방법을 적용 할 수 있을것 같은데
혹시, 염색을 하루 전에 하고 다음날 detection해도 안정할가요 ?? 
알연구원나부랭이  |  09.13 09:18  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
 됩니다, 그러나 단순히 cell cycle 분석을 위해 메탄올 등으로 고정하는 경우에도 너무 오래 두지 않는 것이 좋은 결과를 주듯 마찬가지입니다.

...  |  09.14 23:13   
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