실험 Q&A Immunology > ELISA
ELISA 결과가 안나오네요..
sanseung (비회원)
안녕하세요.
ELISA를 배우고 있습니다.. 제 맘처럼 실험결과가 나오지 않아서 걱정이 많습니다ㅠㅠ
protocol에 따라 실험을 했는데 리딩해보면 제대로 희석이 되지 않은 것 처럼 OD값이 나옵니다.
자세한 실험법은 아래와 같습니다
1. 실험하기 하루 전에 antigen으로 coating 합니다.
2. 코팅된 플레이트를 washing하고 diluent로 1hr blocking 합니다.
3. 그 동안 샘플을 prep.합니다.
최종 농도인 4000ng/ml으로 희석한 후 dilution plate에서 serial dilution을 합니다
96 plate의 맨 위 A열에 준비한 sample을 200㎕을 깔고 B-H열에 dilent를 180㎕을 넣고
A열에서 60㎕을 따서 아래로 계열 희석을 해줍니다. (4배 희석)
4. 블로킹이 완료된 플레이트를 씻어주고 희석된 샘플을 넣어 한시간 동안 binding 해줍니다.
5. 바인딩이 완료된 플레이트를 다시 씻어주고 HRP로 넣고 30분 동안 incubaion해주고
다시 씻어준 후에 TMB를 넣고 발색이 완료되었다 싶으면 황산처리하여 반응을 종료합니다.
결과는 첨부 사진처럼 나옵니다.. 사진을 보시면 아시겠지만 네번째부터 거의 희석이 안되었습니다. curve가 거의 flat하게 나오고..
material/reagent나 washer의 문제일 수 있다고 생각하여 다음날 제가 코팅한 플레이트로 선배님이 실험해 보았지만 결과는 정상적으로 아무 문제 없이 나왔습니다..
문제는 실험을 하면 계속 이렇게 나오는게 아니라 결과가 나왔다가 저렇게 나왔다가 한다는 거죠ㅠㅠ 계속 잦은 fail로 걱정이 많습니다.
계열희석할 때가 제일 큰 원인이라고 생각해서 특히나 집중해서 하지만
결과는 복불복처럼 나옵니다... 어디서 실수를 하는지 모르니 너무 답답하네요
문제가 무엇인지 도움 부탁드립니다...
또는 elisa할 때 주의할 사항도 알려주세요ㅠㅠ
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