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질문 rt pcr 이후 cdna 합성 확인 때문에요..
알yep  |  2011-02-10 16:21

이번에 cdna 합성 처음 해본 실험 초보학생입니다.
저는 rt pcr 까지 끝낸 후에, 그 cdna를 가지고 바로 그냥 pcr을 했는데요,
cdna가 제대로 만들어졌는지 확인해 본 후 pcr 해야 한다고 그러더라구요..
근데 b-actin을 사용해서 확인할건데,
b-actin 이 유전자인가요 아님 프라이머인가요?
인터넷 뒤져 봤는데 housekeeping gene이라고 뜨는걸로 봐선 유전자인거 같은데..
제가 만든 cdna와 이 housekeeping gene으로 다시 pcr 해서 합성을 확인하는 건가요? ㅠㅠ
근데, cdna 합성이 제대로 되었는지 여부는 제가 했던것처럼
바로 pcr 해 봐도 알 수 있는거 아닌가요?
래더마커 걸구, 밴드 크기가 맞으면 제대로 합성 되었다고 생각해도 되는 건가요?

#cdna
#b-actin
#cdna 합성
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

일단 RNA 추출 후에 전기영동하여 RNA는 잘 추출되었다고 생각하고 답변드립니다.
Housekeeping Gene이란 세포 생존에 필수불가결한 유전자로 어떠한 상황에서도 발현되는 유전자를 의미합니다. 따라서, 어떠한 조건이든 모든 세포에서 발현이 되는 유전자겠지요..
베타 엑틴 (b-actin) 은 유전자입니다 (여러 유전자가 있습니다. GAPDH 등). 이를 확인하기 위하여는 프라이머가 필요하겠지요. 합성하셔야 합니다. 님께서 만드신 rt-pcr 시료 (PCR template로 이용할 시료)에는 목적유전자와 하우스키핑진이 함께 들어 있다고 보시면 됩니다. 즉, 동일 시료를 주형으로 하여 목적유전자의 프라이머와 하우스키핑진의 프라이머들을 이용하여 증폭하면 됩니다.
대부분의 실험에서 목적유전자와 하우스키핑진을 함께 증폭합니다 (발현량 비교실험의 경우).
왜냐면, 사용된 세포의 량이 다를 수 있고, 세포 간에 생존 조건이 다를 수도 있기 때문입니다.
자세한 내용은 공부....

저도 초짜  |  2011-02-10 18:09
Citing URL: http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=192293
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